人冠状病毒NL63受体结合区蛋白的原核表达纯化与鉴定

发布时间：2017-10-12 15:00

  本文关键词：人冠状病毒NL63受体结合区蛋白的原核表达纯化与鉴定

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【摘要】：人冠状病毒NL63受体结合区蛋白是其免疫学诊断和疫苗研究的主要靶点,在受体吸附、病毒进入细胞及膜融合中起关键作用。本研究在E.coli系统中进行人冠状病毒NL63受体结合区(RBD)大、小蛋白的表达纯化,并对其进行免疫学鉴定。首先密码子优化设计合成了HCoV-NL63的RBD大片段(RL:232-684aa)与小片段(RS:476-616aa)的编码基因,并将其克隆进硫氧还蛋白表达载体pM48,构建了人冠状病毒NL63的受体结合区蛋白(RBD)大(RL)、小(RS)片段与硫氧还蛋白的融合表达质粒;转化E.coli BL21pLys S,利用IPTG进行诱导表达,用镍亲和层析对蛋白进行纯化,并以表达HCoV-NL63RL与RS蛋白的重组痘苗病毒免疫小鼠血清对重组蛋白进行免疫印迹鉴定。结果表明在37℃,0.8mM IPTG诱导4h时,蛋白表达量达到最高,融合蛋白主要以包涵体形式表达,纯化后纯度可达95%以上。Western blot显示,两个融合蛋白均与痘苗病毒(天坛株)表达的HCoV-NL63RL与RS蛋白免疫的小鼠血清发生特异性反应。本研究首次在国内用原核系统表达纯化并鉴定了人冠状病毒NL63受体结合区大小蛋白(RL和RS),为人冠状病毒NL63感染的免疫学检测与疫苗研究提供了基础。
【作者单位】： 吉林大学白求恩医学院遗传学系;中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所;温州医学院医学病毒学研究所;
【关键词】： HCoV-NL 受体结合区蛋白 重组蛋白 表达 大肠杆菌
【基金】：国家863课题(2007AA02Z464) 传染病重大专项(2008ZX10004-014)
【分类号】：R373.1
【正文快照】： 冠状病毒(coronavirus,CoV)是有包膜的单股正链RNA病毒,属于巢式病毒目(nidovirales),冠状病毒科(coronaviridae),冠状病毒属(genus:coronavirus)[1-2]。人冠状病毒NL63(HCoV-NL63)是2004年荷兰阿姆斯特丹大学的研究人员van der Hoek等从一患有毛细支气管炎和结膜炎的7个月女

【二级参考文献】

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1 阮力,郑浩强,徐水婵,王双平,曹旭,解燕乡,朱既明;呼吸道合胞病毒糖蛋白F和G在同一个重组痘苗病毒中的表达[J];病毒学报;1992年02期

【相似文献】

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1 吴方波;HCoV-NL63和HCoV-229E血清IgG抗体ELISA检测法的建立及初步应用[D];福建医科大学;2012年

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本文编号：1019339