稳定表达HBx的肝前体细胞株的构建及其对增殖的影响

发布时间：2017-10-13 11:05

  本文关键词：稳定表达HBx的肝前体细胞株的构建及其对增殖的影响

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【摘要】：目的构建稳定表达乙型肝炎病毒X蛋白(HBx)的肝前体细胞株,检测对肝前体细胞增殖,细胞周期及Wnt/β-catenin信号通路的影响。方法重组质粒pSEB-Flag-HBx与包装质粒pAmpho共同转染人胚胎肾上皮细胞系293T细胞,包装获得携带HBx基因的重组逆转录病毒,并感染小鼠肝前体细胞HP14.5,稻瘟菌素(blasticidin)筛选出稳定表达HBx基因的细胞克隆并扩大培养(HP14.5/HBx组),设HP14.5/Rv(空质粒pSEEB-Flag感染组)及空细胞组HP14.5组为对照组。MTS比色法检测各组细胞的增殖活力,流式细胞术检测细胞周期中各时相所占的比例,荧光定量PCR检测cyclin D1和c-myc mRNA的表达量,Western blot法检测HBx、GSK3β、p-GSK3β(ser-9)、β-catenin、cyclin D1以及c-myc等蛋白的表达。结果 RT-PCR和Westernblot法检测到HBx基因和蛋白阳性表达,与对照组相比,HP14.5/HBx细胞增殖活力显著增加(P0.05);G1细胞比例明显减少(P0.05),S期和G2细胞比例显著升高(P0.05);cyclin D1和c-myc mRNA的表达量显著升高(P0.05);GSK3β蛋白水平表达无明显变化(P0.05),p-GSK3β、β-catenin、cyclin D1和c-myc蛋白的表达水平显著升高(P0.05)。结论成功筛选出稳定表达HBx的肝前体细胞株,HBx通过活化Wnt/β-catenin信号途径促进肝前体细胞的增殖。
【作者单位】： 重庆医科大学分子医学与肿瘤研究中心;重庆医科大学细胞生物学遗传学教研室;重庆医科大学基础医学院病理生理学教研室;
【关键词】： 乙型肝炎病毒X蛋白 肝前体细胞 细胞增殖 wnt/β-catenin信号途径
【基金】：国家自然科学基金(81071770,81201679)
【分类号】：R363
【正文快照】： 近年来,越来越多的研究证实,乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)与原发性肝癌(hepatocellularcarcinoma,HCC)的发生,转移和复发有着密切的关系,这个过程中所涉及的机制尚不清楚[1]。HBV基因组包括4个开放阅读框(S、C、P、X),其中HBx是一个多功能蛋白,影响宿主细胞的增殖、

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1 刘蔚,王建军,成军,张连峰,纪冬,刘妍,郭江;乙型肝炎病毒X蛋白上调白细胞介素-18基因的表达[J];中西医结合肝病杂志;2004年03期

2 张p，

本文编号：1024490