弓形虫MIC8基因与基因佐剂IL-12共免疫小鼠的保护性研究（英文）

发布时间：2017-10-14 04:09

  本文关键词：弓形虫MIC8基因与基因佐剂IL-12共免疫小鼠的保护性研究（英文）

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【摘要】：目的观察弓形虫MIC8基因和基因免疫佐剂白细胞介素(IL-12)共免疫小鼠所诱导的免疫保护性。方法将编码弓形虫MIC8的基因插入到真核表达质粒载体pc DNA3.1中,构建真核表达质粒pcMIC8,并转染至HeLa细胞,蛋白免疫印迹分析(Western blotting)检测重组蛋白的表达情况。80只昆明小鼠随机均分为5组,分别为对照组(PBS组、pcDNA3.1空质粒组、pcIL-12质粒组)、pcMIC8质粒组以及pcMIC8+pcIL-12质粒共免疫组。共免疫组以pcMIC8质粒和pcIL-12质粒各100μg(溶于100μl PBS)肌注昆明小鼠后腿股,共免疫3次,每次间隔2周,PBS组、pcDNA3.1空质粒组、pcIL-12质粒组和pcMIC8质粒组分别注射等量的PBS、pcDNA3.1空质粒、pcIL-12质粒和pcMIC8质粒,同法免疫。免疫前及初次免疫后13 d、27 d、41 d和55 d,用ELISA测小鼠血清中抗体IgG和IgG2a的表达水平。末次免疫后4周,ELISA法测各实验组小鼠脾细胞培养液上清中γ干扰素(IFN-γ)和IL-4的表达水平。末次免疫后3周,各组小鼠腹腔注射接种103弓形虫RH株速殖子,观察小鼠受攻击感染后的存活时间。结果 Western blotting显示,重组质粒pcMIC8能在HeLa细胞中表达,蛋白相对分子质量(M r)约为74 000。初次免疫后55d,共免疫组小鼠血清IgG(0.51±0.028)、IgG2a(0.261±0.04)抗体水平高于pcMIC8质粒组(0.409±0.031、0.159±0.031)和对照组(P0.05),lgG1抗体在各实验组之间未见有显著差异。末次免疫后4周,共免疫组小鼠脾细胞培养上清中IFN-γ含量(1083.27±925.34)显著高于pcMIC8质粒组(497.65±98.15)和对照组(PBS 47.18±2.73,pcDNA3.1 50.08±4.62,pcIL-12 118.15±12.73)(P0.05);各组IL-4的水平差异无统计学意义(P0.05)。攻击感染后,共免疫组小鼠存活时间(15 d)较pcMIC8组(10 d)和对照组(PBS 5d,pcDNA3.1 6d,pcIL-12 8d)显著延长(P0.05)。结论弓形虫MIC8基因与基因佐剂IL-12共免疫小鼠能增强其免疫反应。
【作者单位】： 海南医学院海南省热带病重点实验室;
【关键词】： DNA疫苗 弓形虫抗原MIC 基因佐剂IL-
【分类号】：R392
【正文快照】： Toxoplasma gondii is an obligate intracellular par-asite of the phylum Apicomplexa and can cause severedisease in human and many species of endothermicanimals,with a high prevalence throughout the world[1].Infection in immunocompetent people is usuallyas

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本文编号：1028893