rAd-preS1基因治疗载体的构建及对肝细胞嗜向性检测

发布时间：2017-10-14 17:06

  本文关键词：rAd-preS1基因治疗载体的构建及对肝细胞嗜向性检测

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【摘要】：目的:制备携带PreS1基因的重组腺病毒基因治疗载体,研究其对肝细胞的嗜向性。方法:设计合成含PreS1的腺病毒纤毛Fiber基因片段,置换野生型骨架质粒Fiber片段,同源重组法构建重组体rAd-PreS1,酶切鉴定后HEK293包装生成腺病毒,抽提蛋白Western blot检测目的蛋白PreS1表达。重组腺病毒rAd-preS1分别转染人正常肝细胞L02、人肺癌细胞A549、人喉癌细胞Hep2、人卵巢癌细胞SKOV3,同时野生腺病毒rAd作为阴性对照,荧光显微镜下观察各细胞内绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)表达程度,用细胞的病毒滴度值表示,检测其对肝细胞的嗜向性。结果:经酶切鉴定成功构建rAd-preS1载体,Western blot示蛋白分子量大小均约为63 kD目的条带。rAd-preS1感染L02细胞组GFP表达程度明显强于A549、Hep2及SKOV3细胞组(P均是0.000),而A549、Hep2及SKOV3各细胞组间GFP表达差异无统计学意义(P0.05);对照组各细胞组间GFP表达差异无统计学意义(P0.05)。结论:含PreS1的重组腺病毒rAd-preS1显示出对人肝细胞具有较强嗜向性,而对非肝细胞无明显效果,这为进一步研究肝脏疾病靶向基因治疗奠定了基础。
【作者单位】： 重庆医科大学附属儿童医院儿科研究所;
【关键词】： 重组腺病毒 PreS基因 肝细胞嗜向性 基因治疗
【基金】：国家自然科学基金资助项目(编号:30871161)
【分类号】：R341
【正文快照】： 肝脏疾病是威胁到人类健康的严重疾病之一,包括肿瘤、遗传病及病毒性肝炎,多年来关于肝脏基因治疗的目的基因有很多,但发展仍缓慢,原因之一是缺乏高效特异靶向肝细胞的治疗载体。PreS1 21~47氨基酸(amino acid,aa)是乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)嗜肝性的主要分子机制

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前1条

1 韩聚强,胡大荣,胡学玲,孙殿兴,范公忍,刘超英,吴忆贫;以乙型肝炎病毒为载体的基因治疗研究[J];中华肝脏病杂志;2003年06期

【共引文献】

中国期刊全文数据库 前7条

1 陈京龙;魏红山;刘霞;蓝孟东;范小玲;;原位聚合酶链反应检测肝细胞内乙型肝炎病毒共价闭合环状的DNA表达[J];北京医学;2007年09期

2 徐吉祥,王淑英,徐丹宇,岳秀春;自拟克肝新胶囊治疗慢性乙型肝炎90例[J];包头医学院学报;2004年01期

3 韩聚强,胡大荣,孙殿兴,胡学玲,李娟,范公忍,刘超英,吴忆贫;C基因截短型HBV载体的复制、包装与表达[J];中华传染病杂志;2004年01期

4 邸雅南;胡大荣;胡学玲;吴忆贫;;HBVC基因截短型突变体抗HBV作用研究[J];中华传染病杂志;2005年05期

5 邸雅南,胡大荣,范公忍,胡学玲,刘超英,刘勇,吴忆贫;C基因截短突变体抗乙型肝炎病毒作用机制的研究[J];中华肝脏病杂志;2004年05期

6 韩聚强,胡大荣,熊锦华,胡学玲,范公忍,李娟,刘超英,邸雅南,吴忆贫;C基因截短的HBV复制与包装[J];中华实验和临床病毒学杂志;2004年01期

7 邓鑫,梁健;慢性病毒性肝炎的基因治疗研究现状[J];浙江中西医结合杂志;2004年11期

中国博士学位论文全文数据库 前1条

1 邸雅南;利用复制干扰突变构建具有抗HBV作用的显性阴性突变体研究[D];第三军医大学;2004年

中国硕士学位论文全文数据库 前4条

1 朱晓梅;嗜肝性重组腺病毒基因治疗载体的构建及功能鉴定[D];重庆医科大学;2011年

2 安小平;HBV和HIV假病毒载体系统的初步研究[D];中国人民解放军军事医学科学院;2007年

3 牟斌;IL-24基因对B16细胞移植瘤抑制作用的探讨[D];延边大学;2013年

4 张丽;携HBV PreS1重组腺病毒基因治疗载体对肝细胞嗜向性的研究[D];重庆医科大学;2013年

【二级参考文献】

中国期刊全文数据库 前1条

1 孙殿兴 ,胡大荣 ,邬光惠 ,胡学玲 100700,李娟 ,范公忍;基因重组HBV联合表达反义RNA和显性阴性突变体抗HBV作用及HBV包装细胞系的构建[J];中华肝脏病杂志;2002年04期

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 廖亚平;张洁;周俊宜;汪华侨;;人端粒酶催化亚单位hTERT基因重组腺病毒载体的构建与鉴定[J];神经解剖学杂志;2006年06期

2 朱雄鹏;陈志哲;林旭;杨婷;许贞书;吕璐璐;陈彩平;;重组腺病毒介导survivin基因修饰的树突细胞体外诱导抗HL-60细胞免疫的研究[J];中华血液学杂志;2006年09期

3 司英健;张曦;陈幸华;刘耀;高蕾;高力;彭贤贵;光丽霞;王庆余;;间隙连接蛋白43和绿色荧光蛋白双基因共表达重组腺病毒载体的构建和鉴定[J];中国实用内科杂志;2007年S1期

4 卓贤露;姜振东;魏运军;鲁立;张学渊;袁伟;;大鼠O tos基因重组腺病毒载体的构建和鉴定[J];第三军医大学学报;2008年06期

5 陈邦党;马翔;马依彤;杨毅宁;刘芬;;细菌内同源重组法快速制备重组腺病毒[J];新疆医科大学学报;2009年12期

6 史丽云,孙红颖,张立煌;人胸腺基质淋巴生成素基因重组腺病毒载体的构建及表达[J];细胞与分子免疫学杂志;2005年02期

7 吴淼;余佩武;王自强;赵永亮;雷晓;曾冬竹;朱自满;;反义B7-H1位置特异性腺病毒载体的构建与鉴定[J];第三军医大学学报;2006年05期

8 付霞霏;何援利;;绿色荧光蛋白标记大鼠间充质干细胞的实验研究[J];广东医学;2008年02期

9 张全彬;王黎明;徐燕;;重组腺病毒介导增强型绿色荧光蛋白基因转染兔骨髓间充质干细胞[J];中国组织工程研究与临床康复;2009年23期

10 陈国晓;匡幼林;翁小东;陈志远;祝恒成;江波涛;刘修恒;;4-1BBL重组腺病毒载体的构建及表达[J];山东医药;2010年19期

中国重要会议论文全文数据库 前10条

1 汪琦;朱舟;王伟;;大鼠缝隙连接蛋白Connexin 43的shRNA重组腺病毒载体的构建与鉴定[A];中华医学会第十三次全国神经病学学术会议论文汇编[C];2010年

2 郭浩;彭毅志;辛海明;;小鼠CCR7基因重组腺病毒的构建与鉴定[A];第八届全国烧伤外科学年会论文汇编[C];2007年

3 樊守艳;梁平;张晓燕;;小鼠FAM3C基因重组腺病毒载体的构建与鉴定[A];中南地区第八届生理学学术大会论文摘要汇编[C];2012年

4 庞小娟;赵晓琴;彭薇;臧宇辉;陈芳芳;罗冰;虞伟;秦浚川;李晓军;;分化抑制因子3重组腺病毒载体的构建及鉴定[A];中华医学会第八次全国检验医学学术会议暨中华医学会检验分会成立30周年庆典大会资料汇编[C];2009年

5 郭浩;彭毅志;辛海明;;小鼠CCR7基因重组腺病毒的构建与鉴定[A];第八届西南五省一市烧伤整形学术会议暨贵州省医学会烧伤整形分会2010年学术年会论文汇编[C];2010年

6 辛海明;彭毅志;郭浩;袁志强;;小鼠CCR7腺病毒体外转染对未成熟树突状细胞的影响[A];第八届西南五省一市烧伤整形学术会议暨贵州省医学会烧伤整形分会2010年学术年会论文汇编[C];2010年

7 张睿娟;杨林花;周剑峰;;类果蝇分节因子4反义腺病毒载体的构建和鉴定[A];第12届全国实验血液学会议论文摘要[C];2009年

8 郭景茹;杨焕民;计红;臧琳;郭爽;王忠伟;张旭;;Wistar大鼠HSP70基因重组腺病毒载体的构建及其病毒制备[A];全国动物生理生化第十一次学术交流会论文摘要汇编[C];2010年

9 陆才生;马会慧;魏秋静;古洁若;;CTLA4Ig基因重组腺病毒载体的构建及其功能测定[A];第十届全国风湿病学学术会议论文集[C];2005年

10 梁绍燕;金先庆;罗庆;;结缔组织生长因子的克隆及其重组腺病毒的构建[A];中国西南地区第九届小儿科学术会议论文汇编[C];2008年

中国博士学位论文全文数据库 前10条

1 夏天;重组腺病毒AdCD40Ig联合供体静息B淋巴细胞预处理诱导小鼠皮肤移植耐受的研究[D];四川大学;2004年

2 董磊;以前列腺干细胞抗原为靶点的重组蛋白及重组腺病毒载体疫苗的研究[D];中国人民解放军军事医学科学院;2011年

3 吴诗坡;基于重组腺病毒载体的烈性病原体疫苗研究[D];中国人民解放军军事医学科学院;2013年

4 葛良鹏;提高腺病毒对猪皮肤组织转染效率的研究[D];第三军医大学;2008年

5 詹鹰;构建siRNA抑制阴茎海绵体平滑肌细胞PDE5基因表达治疗ED的研究[D];华中科技大学;2007年

6 曹慧青;共表达CD/TK双自杀基因对血管平滑肌细胞增殖的影响[D];中国协和医科大学;2001年

7 谭灿;hCUL4A过表达对缺氧/缺血—再供氧/再灌注损伤的保护作用及机制初探[D];中南大学;2012年

8 马春玲;SARS-CoV N蛋白免疫原性和致病性的初步研究[D];南京医科大学;2006年

9 樊彩斌;IKK2dn转染并负载供体抗原的受体未成熟树突状细胞诱导免疫耐受的实验研究[D];苏州大学;2008年

10 余资江;noggin基因修饰神经干细胞移植治疗衰老模型小鼠的实验研究[D];第三军医大学;2006年

中国硕士学位论文全文数据库 前10条

1 邱俊钦;人骨形态蛋白-2基因重组腺病毒载体的构建及修饰骨髓间充质干细胞的实验研究[D];福建医科大学;2011年

2 周建民;人SCL基因重组腺病毒表达载体的构建[D];石河子大学;2011年

3 单连华;FoxM1相关重组腺病毒载体小试生产及初步质量控制研究[D];湖南大学;2011年

4 邱敏;力生长因子对成骨细胞生理调控作用的研究[D];重庆大学;2010年

5 黄舒洁;含hTK1和hTIMP1双基因共表达重组腺病毒载体的构建及对大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响[D];福建医科大学;2013年

6 代婷婷;大鼠Foxo3a基因的克隆及其重组腺病毒载体的构建[D];南方医科大学;2010年

7 刘瑜;CXCR4-siRNA重组腺病毒载体的构建及其沉默CXCR4基因的体外研究[D];重庆医科大学;2012年

8 陈水木;结核分枝杆菌MPT83重组腺病毒载体的构建及表达[D];西南大学;2008年

9 迟建光;Ad-BDNF转染体外培养乳鼠雪旺细胞的相关实验研究[D];山东中医药大学;2008年

10 李伟;鼠重组IL-12腺病毒经脂质体包埋转染Kupffer细胞的实验研究[D];苏州大学;2006年

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本文编号：1032145