pAcGFP1-C1-Ngb真核表达载体的构建及在SH-SY5Y细胞中的表达

发布时间：2017-10-15 11:05

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【摘要】：目的克隆SD大鼠脑红蛋白(Ngb)基因至真核表达载体pAcGFP1-C1,构建表达质粒pAcGFP1-C1-Ngb,并转染至人SH-SY5Y细胞表达Ngb蛋白。方法提取大鼠肝脏组织总RNA,采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)方法扩增大鼠Ngb基因,与双酶切的pAcGFP1-C1连接,从而构建pAcGFP1-C1-Ngb真核表达质粒。转染SH-SY5Y细胞,并用Western blot的方法鉴定Ngb蛋白在SH-SY5Y细胞中的表达。结果获得SD大鼠Ngb基因全长序列和重组真核表达载体pAcGFP1-C1-Ngb。Western blot结果显示,转染pAcGFP1-C1-Ngb后的SH-SY5Y细胞Ngb基因有稳定的表达。结论成功地克隆了SD大鼠Ngb基因、构建了pAcGFP1-C1-Ngb真核表达载体,并在人SH-SY5Y细胞中获得Ngb蛋白的稳定表达,为进一步研究Ngb基因在细胞中的功能奠定了基础。
【作者单位】： 大连医科大学附属第二医院眼科;中国医科大学附属盛京医院眼科;
【关键词】： Ngb 载体构建 SH-SYY细胞 转染
【分类号】：R346
【正文快照】： Construction of Eukaryotic Expression Vector pAcGFP1-C1-Ngb and Its Expression inHuman SH-SY5Y Cells脑红蛋白(neuroglobin,Ngb)是2000年由德国Burmester等首先发现的一种携氧球蛋白,是继血红蛋白(Hb)和肌红蛋白(Mb)之后的第三种携氧球蛋白[1]。主要在脑组织中表达,故

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本文编号：1036750