抗微小隐孢子虫TSP6蛋白单克隆抗体的制备与鉴定

发布时间：2017-10-17 08:04

  本文关键词：抗微小隐孢子虫TSP6蛋白单克隆抗体的制备与鉴定

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【摘要】：目的在大肠埃希菌中可溶性表达微小隐孢子虫TSP6抗原分子,并以其纯化产物为抗原,利用杂交瘤技术生产抗TSP6单克隆抗体(McAb)。方法将pGEX-4T-1-TSP6重组质粒转化大肠埃希菌BL21(DE3),经0.1mmol/LIPTG诱导表达后超声破菌,获得可溶性表达产物,通过Gluthathione-Sepharose 4B磁珠纯化蛋白质,以纯化的重组TSP6为抗原免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术进行细胞融合,用ELISA和有限稀释法筛选分泌高滴度McAb的杂交瘤细胞株,测定其免疫球蛋白亚类及效价,Western blot分析其特异性。结果筛选出2株杂交瘤细胞能稳定分泌抗TSP6单克隆抗体,经鉴定均为IgG1。Western blot分析显示,制备的单抗均能与相应的重组蛋白特异性结合。结论制备的抗TSP6杂交瘤细胞株能分泌高特异性的McAb。
【作者单位】： 人兽共患病教育部重点实验室吉林大学人兽共患病研究所;吉林大学第一医院;
【关键词】： 微小隐孢子虫 TSP抗原 可溶性表达 单克隆抗体
【基金】：国家自然科学基金项目(No.31072125)
【分类号】：R392
【正文快照】： 微小隐孢子虫(Cryptosporidium parvum)是一种能引起世界范围内人和动物腹泻的重要寄生性原虫,由于缺少疗效稳定的抗虫药物和公认的预防措施,目前隐孢子虫病的防治依旧是世界性的难题。寻找有效的疫苗候选抗原是控制隐孢子虫病的关键。微小隐孢子虫子孢子与宿主肠上皮细胞间

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本文编号：1047684