蓝氏贾第鞭毛虫稳定表达载体的构建

发布时间：2017-10-17 23:42

  本文关键词：蓝氏贾第鞭毛虫稳定表达载体的构建

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【摘要】：目的构建蓝氏贾第鞭毛虫基因的稳定表达载体。方法以本实验室构建的pGL gdh-Neo为基础,在gdh5′UTR端ApaⅠ酶切位点前插入蓝氏贾第鞭毛虫磷酸丙糖异构酶(tim)基因以方便载体与贾第虫基因组整合,得到pGLtim-gdh-Neo;设计含有16个酶切位点的多克隆位点区(MCS)并将其置于α2-Tubulin启动子调控下,使成为一个完整表达框,合成该表达框并单酶切插入重组质粒pGL tim-gdh-Neo的ApaⅠ位点,获得重组稳定表达质粒载体pGL tim-Tub-MCS-gdh-Neo。在MCS区插入Luc验证其有效性,以pTAL-Luc质粒为模板,扩增Luc基因序列,纯化后将其插入EcoRⅤ单酶切的pGL tim-Tub-MCS-gdh-Neo多克隆位点区,重组质粒线性化后转染虫体,并对G418筛选获得的Luc贾第虫重组株进行荧光素酶活性检测。结果构建了可稳定转染,带有多克隆位点区及Neo抗性基因的重组表达载体pGL tim-Tub-MCS-gdh-Neo,其长度为5 395bp;Luc重组质粒pGL tim-Tub-Luc-gdh-Neo可稳定转染至贾第虫并表达荧光素酶。结论成功构建了蓝氏贾第鞭毛虫稳定表达载体pGL tim-Tub-MCS-gdh-Neo。
【作者单位】： 大连大学医学研究中心分子生物学实验室;大连大学环化学院;
【关键词】： 蓝氏贾第鞭毛虫 α-微管蛋白 磷酸丙糖异构酶 稳定表达载体
【基金】：国家自然科学基金项目(No.30872207,30901253)
【分类号】：R382.21
【正文快照】： 蓝氏贾第鞭毛虫(Giardia lamblia)简称贾第虫,为人体致病性原虫,可导致腹泻、营养吸收不良综合征及儿童生长障碍。该病呈全球性分布,是发达国家中最常见的人体肠道寄生虫病,被世界卫生组织列为全世界危害人类健康的10种主要寄生虫病之一[1]。贾第虫属于真核生物的早期分支,这

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