融合基因CPA-LTB在大肠埃希菌中表达条件的优化

发布时间：2017-10-20 04:37

  本文关键词：融合基因CPA-LTB在大肠埃希菌中表达条件的优化

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【摘要】：目的在构建含有CPA-LTB融合基因的重组菌株基础上,对其表达条件进行优化,以获得高效表达的CPALTB融合蛋白。方法采用限制性内切酶酶切鉴定含CPA-LTB融合基因的重组质粒pCPA-LTB,然后采用均匀设计法对影响目的蛋白表达的因素和水平进行优化:设计实验方案,分别以不同浓度的IPTG和乳糖为诱导剂诱导融合蛋白的表达,SDS-PAGE检测不同条件下融合蛋白的表达情况。结果双酶切鉴定重组质粒含有CPA-LTB融合基因(1700bp),且阅读框架正确。以IPTG为诱导剂在pH 7.5、诱导温度31℃、转化菌菌液A600值为1.2、IPTG终浓度0.4mmol/L诱导6h,目的蛋白表达量最大,占菌体总蛋白相对含量的54%;以乳糖为诱导剂在pH 6.5、温度34℃、转化菌菌液A600值为0.6、乳糖终浓度0.1mmol/L诱导6h,融合蛋白的表达量最大,占菌体总蛋白相对含量的61%。优化前后两种诱导剂诱导表达的蛋白量分别增加63%和42%。结论 CPA-LTB融合基因表达质粒转化大肠埃希菌在优化的表达条件下高效表达目的蛋白,为研制α毒素基因工程亚单位疫苗奠定了基础。
【作者单位】： 大同大学呼吸病与职业病研究所;大同大学医学院;
【关键词】： 产气荚膜梭菌α毒素 不耐热肠毒素B亚单位 基因融合 基因表达 优化表达
【基金】：山西大同大学科研项目(No.2009-Q-19)
【分类号】：R378.21
【正文快照】： 产气荚膜梭菌(Clostridium perfringens)是引起人类食物中毒和动物肠毒血症、坏死性肠炎的主要病原菌之一,菌体产生的外毒素是其致病因子[1]。目前发现和鉴定的外毒素有20余种,但起主要作用的毒素只有4种,即α、β、ε和ι。据此该菌被分为A、B、C、D、E等5个毒素型,各型均产

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本文编号：1065285