整合缺陷型重组慢病毒载体构建及HCV重组假型慢病毒颗粒的制备与性状分析

发布时间：2017-10-21 02:34

  本文关键词：整合缺陷型重组慢病毒载体构建及HCV重组假型慢病毒颗粒的制备与性状分析

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【摘要】：为提高慢病毒载体应用的安全性及改进HCV新型颗粒疫苗的制备,首先对传统的慢病毒三质粒系统进行改造:将包装质粒pHR’CMVΔR8.2改造成整合缺陷型的包装质粒pHR’CMVΔR8.2D64E,并在体外感染实验验证其整合缺陷性;将转移质粒中的报告基因GFP替换成HCV的NS3基因,选用表达3种亚型(1a、1b、2a)HCV包膜E1E2的包膜质粒,用改造后的三质粒系统制备了3种亚型(1a,1b,2a)的假型丙型肝炎病毒(HCV)整合缺陷型慢病毒颗粒,并用Western blot方法确定了颗粒上包膜蛋白的表达,通过电镜可观察到浓缩后的HCV慢病毒颗粒结构,HCV慢病毒颗粒感染Huh7细胞后可观察到转基因NS3的表达。为安全高效的慢病毒载体的应用及HCV假型颗粒疫苗研发提供了新的技术路线。
【作者单位】： 卫生部医学病毒与病毒病重点实验室中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所;煤炭总医院中心实验室;
【关键词】： 整合缺陷 慢病毒载体 丙型肝炎病毒 假型颗粒
【基金】：十一五传染病重大专项(2009ZX10004-705,-715)资助项目
【分类号】：R373
【正文快照】： 慢病毒载体能够容纳多达8kb的外源基因[1],在体内体外均能高效转导包括DC细胞在内广泛的细胞类型[2],能够整合外源基因到宿主基因组中引起持续的基因表达,且没有预存免疫[3],载体骨架的免疫原性弱[4-5]。由于这些独特的特征,慢病毒载体作为一种有效的基因转移工具,逐渐应用于

【参考文献】

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本文编号：1070808