小鼠水通道蛋白1基因慢病毒载体构建及其在神经膜细胞中的表达

发布时间：2017-10-22 17:23

  本文关键词：小鼠水通道蛋白1基因慢病毒载体构建及其在神经膜细胞中的表达

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【摘要】：目的构建表达小鼠水通道蛋白1(AQP1)基因的慢病毒载体,体外感染原代培养的C57BL/6小鼠神经膜细胞,观察是否提高AQP1的表达,为进一步研究AQP1与周围神经系统损伤后水肿的关系奠定基础。方法将小鼠AQP1基因克隆到慢病毒pCDH-CMV-MCS-EF1-copGFP载体,通过PCR和测序鉴定获得连接正确的克隆。将鉴定后的重组表达质粒pCDH-CMV-MCS-EF1-copGFP-AQP1与包装质粒psPAX2、pMD共转染293T细胞,制备携带AQP1基因的慢病毒lentivirus-AQP1。体外培养C57BL/6小鼠的神经膜细胞,将lentivirus-AQP1感染神经膜细胞,RT-PCR和蛋白质印迹法检测感染后神经膜细胞AQP1 mRNA和蛋白的表达情况。结果构建的慢病毒载体pCDH-CMV-MCS-EF1-copGFP-AQP1经PCR鉴定和测序正确。慢病毒lentivirus-AQP1感染神经膜细胞后AQP1表达增加(P0.05)。结论成功构建了小鼠AQP1基因的慢病毒表达载体,该载体能有效感染神经膜细胞,使AQP1 mRNA和蛋白表达水平增高。
【作者单位】： 第二军医大学长征医院整形外科;南昌大学第一附属医院整形美容科;
【关键词】： 水通道蛋白 过表达 慢病毒 神经膜细胞
【基金】：国家自然科学基金(31271264) 上海市科委基础研究重点课题(08JC1407100)~~
【分类号】：R363
【正文快照】： 水通道蛋白1(aquaporin-1,AQP1)存在于多种组织细胞中,参与水的排出、吸收及细胞内外水平衡的维持,与组织器官水肿的形成和消除密切相关,对胶质细胞的作用发挥有重要影响,是一种高效介导跨膜水转运的膜蛋白[1]。已有研究发现,AQP1是周围神经系统表达最多的AQP,并且定位在神经

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本文编号：1079345