GGPPS基因干扰腺病毒载体的构建及鉴定

发布时间：2017-10-23 12:02

  本文关键词：GGPPS基因干扰腺病毒载体的构建及鉴定

  更多相关文章： GGPPS基因 干扰 腺病毒

【摘要】：构建GGPPS基因干扰腺病毒质粒载体并加以鉴定.根据GGPPS基因序列设计GGPPS干扰序列引物,定向克隆至穿梭载体pshuttle-H1的BglⅡ和HindⅢ位点,PmeⅠ酶切线性化的pShuttle-H1-SiGGPPS干扰质粒,并与腺病毒载体(pAdEasy-1质粒)共同转化E.coli BJ5183感受态细菌,产生重组腺病毒载体.用PacⅠ酶切线性化的回收质粒,转染293A细胞包装腺病毒颗粒,在倒置显微镜下观察细胞CPE,用TCID50法测定病毒颗粒的浓度,并初步观察病毒感染PC12细胞对目的基因的干扰效率.经酶切鉴定、测序证实成功构建GGPPS基因干扰腺病毒载体.包装的腺病毒浓缩悬液滴度为1.995×107PFU/mL.GGPPS在人中具有保守性,该病毒能在人源的WRL-68细胞中成功表达,并且对GGPPS基因干扰效率达70%以上.
【作者单位】： 南京林业大学森林资源与环境学院江苏省有害生物入侵与控制重点实验室;南京大学医学院江苏省医学分子技术重点实验室;
【关键词】： GGPPS基因 干扰 腺病毒
【基金】：国家自然科学青年基金(31100448) 博士点基金(2113204120004)
【分类号】：R341
【正文快照】： 香叶基香叶基焦磷酸合成酶(Geranylgeranyl diphosphate synthase,GGPPS),(GenBank Accession No.NM_010282),是短链异戊烯二磷酸合成酶家族的成员,可催化法尼基焦磷酸(Fanesyl pyrophosphate,FPP)与异戊烯焦磷酸(Isopenteny pyrophosphate,IPP)的缩合反应,产生由20个碳组成

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前1条

1 赵勇,余龙,高洁,付强,华益民,张宏来,赵寿元;cDNA cloning, chromosome mapping and expression characterization of human geranylgeranyl pyrophosphate synthase[J];Science in China(Series C:Life Sciences);2000年06期

【共引文献】

中国期刊全文数据库 前1条

1 王江南;丁尧;来珊珊;陈卫波;余德才;李朝军;薛斌;;GGPPS多克隆抗体的制备与鉴定[J];南京师大学报(自然科学版);2013年01期

中国博士学位论文全文数据库 前1条

1 汪秀星;儿童时期腮腺炎病毒感染导致成年男性不育与支持细胞的蛋白质异戊二烯化修饰的改变相关[D];南京大学;2013年

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 袁跃彬;赵京生;易伟国;王勇;毛远丽;;军营腺病毒感染暴发后对患者心理干预的效果[J];实用医药杂志;2011年06期

2 陈晨;陶泽璋;陈始明;肖伯奎;王燕;陈伟;;人EGFP-TERT-VEGF-Bcl-xl shRNA重组腺病毒的构建与鉴定[J];华中医学杂志;2009年03期

3 欧阳毅,陈远耀,尹鸿轸;CTL、NK和LAK细胞对腺病毒感染细胞的细胞毒作用的实验研究[J];中国免疫学杂志;1991年06期

4 刘岩;刘芳;叶迅;董继斌;陆琴;李秋华;陈红专;;携带K5基因突变体的腺病毒构建及K5蛋白表达[J];复旦学报(医学版);2008年06期

5 李新平;张鸣生;白利明;邱家琦;白文芳;吴志东;吴博;;hPDGF-BB腺病毒表达载体的构建及其在表皮干细胞中的表达[J];中国临床解剖学杂志;2010年04期

6 赵洪雯;余荣杰;彭侃夫;刘宏;吴雄飞;贺伟峰;张晓蓉;;血管内皮生长因子165基因重组腺病毒载体的构建及转染内皮祖细胞的实验研究[J];中国中西医结合肾病杂志;2008年04期

7 戴卫华,吴雄飞,金锡御;血红素氧化酶1基因重组腺病毒的构建[J];重庆医学;2005年10期

8 徐爱晶;李堂;;应用AdEasy腺病毒载体系统构建鼠白细胞介素10基因重组腺病毒[J];中国组织工程研究与临床康复;2008年07期

9 周彬;梁敏锋;李伟东;王程;王战会;侯金林;;应用腺病毒载体系统将HBV/C全基因组转导入HepG2细胞的方法学研究[J];南方医科大学学报;2008年10期

10 彭瑚;洪涛;王长安;张炳华;屈建国;;应用改建的人5型腺病毒载体表达成人腹泻轮状病毒第5基因编码的内壳蛋白[J];中华实验和临床病毒学杂志;1996年04期

中国重要会议论文全文数据库 前10条

1 高正祥;曹丽丽;罗勤;余莉;刘瀚e，

本文编号：1083279