凝胶电泳蛋白质组学蛋白样品纯化方法比较

发布时间：2017-10-24 05:29

  本文关键词：凝胶电泳蛋白质组学蛋白样品纯化方法比较

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【摘要】：目的探讨超滤法和7种不同沉淀方法纯化含PBS的蛋白样品对蛋白凝胶电泳的影响。方法应用超滤法和7种沉淀方法[包括硫酸铵、氯仿甲醇、酸化丙酮甲醇、乙醇、丙酮、三氯乙酸(TCA)、TCA/丙酮]纯化PBS稀释的混合食管癌组织蛋白(10例),二喹啉甲酸(BCA)、Bradford及2D法测定蛋白浓度并进行一维和二维聚丙烯酰胺凝胶蛋白电泳,Image Master软件分析二维电泳图谱蛋白点。结果 Bradford法和2D法适用于二维电泳水化液溶解的蛋白样品浓度测定。超滤法和硫酸铵沉淀法的蛋白回收率分别为40%和4%,其他方法的蛋白回收率约为22%。丙酮沉淀法纯化蛋白的二维电泳图谱蛋白点边界清晰、分辨率高且数目最多;其次是乙醇沉淀和氯仿甲醇沉淀法;再其次是超滤法,该法纯化蛋白的二维电泳图谱蛋白点表现不同程度的弥散;酸化丙酮甲醇沉淀蛋白的二维电泳图谱中蛋白点丢失最多。结论丙酮沉淀法适用于原始浓度高、体积小的蛋白样品除盐及浓缩,超滤法是原始体积较大、浓度较低蛋白样品浓缩纯化的首选方法。
【作者单位】： 河南大学医学院细胞与分子免疫学重点实验室;河南大学淮河医院内镜室;
【关键词】： 食管 蛋白样品制备 蛋白质组 蛋白沉淀 超滤 二维电泳
【基金】：国家自然科学基金资助项目(81072039) 河南省高等学校青年骨干教师资助计划(2011年)
【分类号】：R341
【正文快照】： 蛋白样品制备及纯化是蛋白质组学研究的关键步骤之一,直接影响着实验的稳定性、重复性及实验数据的可靠性[1]。然而,来源于生物体的组织或体液蛋白样品均含有不同程度的盐类、核酸、脂类等组分干扰蛋白质组研究,或者蛋白浓度极低,如胸腹水、唾液、尿液、脑脊液等,需经进一步的

【共引文献】

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4 王海英;何媛媛;黄丽丽;韩青梅;;苹果树腐烂病菌胞外蛋白提取方法[J];生物技术通报;2014年07期

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本文编号：1087268