噬菌体展示肽库筛选VPAC1高亲和力结合多肽

发布时间：2017-10-27 23:24

  本文关键词：噬菌体展示肽库筛选VPAC1高亲和力结合多肽

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【摘要】：目的通过噬菌体展示肽库技术筛选VPAC1高亲和力结合十二肽配体,并进行特异性和亲和力鉴定。方法建立稳定表达VPAC1的真核细胞系;利用噬菌体肽库展示技术进行全细胞差减筛选,随机挑取40个噬菌体克隆进行测序,初步鉴定确定阳性克隆,明确外源十二肽序列,固相合成该十二肽;利用体外竞争结合ELISA及流式细胞分析,鉴定目标多肽与VPAC1受体结合的特异性及亲和力。结果成功构建稳定表达VPAC1细胞系;经过4轮差减筛选,回收噬菌体逐轮得到富集,随机挑取40个克隆测序,共得到15条序列不同的多肽,经ELISA鉴定有7个克隆与细胞有特异性高结合能力;阳性噬菌体克隆与细胞结合通过多肽VP1介导;VP1能特异高亲和地与VPAC1受体结合。结论通过噬菌体展示肽库技术成功筛选得到与VPAC1高亲和力特异结合十二肽。
【作者单位】： 第三军医大学西南医院核医学科;北京师范大学化学学院放射性药物教育部重点实验室;
【关键词】： VPAC 稳定转染 噬菌体展示肽库 十二肽 分子探针
【基金】：北京师范大学放射性药物教育部重点实验室开放基金(120204)~~
【分类号】：R346
【正文快照】： 血管活性肠肽受体(vasoactive intestinal peptidereceptor,VIPR)属于7次跨膜G蛋白偶联受体家族,整个受体包括3个部分:N-末端胞外域,含1个疏水的N端信号肽以及VIP结合位点;跨膜域,含7个疏水的跨膜片段;C-末端胞浆域,与信号转导相关。目前发现血管活性肠肽受体有3种亚型:VPAC1

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