定点突变和随机突变PCR构建噬菌体突变次级抗体库方法的比较

发布时间：2017-10-28 01:08

  本文关键词：定点突变和随机突变PCR构建噬菌体突变次级抗体库方法的比较

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【摘要】：目的以突变Tomlinson I库中筛选的抗细胞黏附分子L1的胞外区单链抗体为例,对定点突变和随机突变两种构建噬菌体抗体次级库的方法进行比较。方法设计定点突变和随机PCR引物在基因水平经PCR、酶切、连接将已有噬菌粒引入突变后转染大肠杆菌构建噬菌体次级抗体库;之后使用噬菌体ELISA确定阳性单克隆比例,采用皮尔森χ2检验进行比较。结果两种方法构建的次级抗体库库容分别为1.4×106pfu/mL和2.5×106pfu/mL,两库阳性单克隆比例分别为32.5%和35.5%,二者相比差异无统计学意义(P0.05)。结论两种突变方法都有望获得高亲和力的抗体。
【作者单位】： 汕头大学医学院神经科学中心;
【关键词】： 定点突变PCR 随机突变PCR 噬菌体次级抗体库 单克隆
【基金】：国家自然科学基金(81171138)
【分类号】：R392.11
【正文快照】： 随着人们对抗体研究的不断深入,基因工程抗体以其可规模化生产等优点得到越来越广泛的应用。人源抗体库筛选技术作为基因工程抗体的一种,能够高效快速的在体外找到与特异性抗原结合的抗体。细胞黏附分子L1(cell adhesion molecule L1,L1CAM)作为免疫球蛋白超家族分子中的重要

【参考文献】

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1 刘文俊;赵祖国;吕世静;晏双双;;噬菌体展示技术在抗体亲和力成熟中的应用进展[J];免疫学杂志;2012年07期

2 罗锋;余腾;范丽梅;;感受态细胞制备和质粒转化冰浴时间对大肠埃希菌转化效率的影响[J];江汉大学学报(自然科学版);2011年03期

3 汪保安,陈晓穗,王欲晓,曲佳,周丽君,王琰;通过随机突变提高抗TNF-α单链抗体的亲和力[J];细胞与分子免疫学杂志;2005年04期

4 吴懿娜;杜欣军;张伟伟;董峰;王硕;;噬菌体抗体库技术及其应用[J];细胞与分子免疫学杂志;2010年04期

5 田辉;白福良;徐黎明;王文飞;牛泽杉;任桂萍;李德山;;错配PCR技术提高抗hIL17A单链抗体亲和力的研究[J];细胞与分子免疫学杂志;2012年07期

6 齐海迪;缪小牛;张娟;谷凯;张斯维;王e，

本文编号：1105976