登革Ⅱ型病毒前膜蛋白基因反向重复序列具有干扰病毒复制的作用

发布时间：2017-10-28 02:27

  本文关键词：登革Ⅱ型病毒前膜蛋白基因反向重复序列具有干扰病毒复制的作用

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【摘要】：目的构建含有登革Ⅱ型病毒(DENV-2)前膜蛋白(prM)基因反向重复序列(irRNA)的重组质粒,评价其抑制病毒复制的效果。方法 DENV-2接种乳鼠,提取总RNA,在正义和反义引物两端分别加上XhoⅠ和EcoRⅠ的识别位点,将经RT-PCR扩增的prM全长基因片段插入pcDNA3.1(+)中,形成含有prM反向序列的重组质粒pcDNA-asprM;于另一对正义和反义引物两端引入酶切位点NheⅠ和BglⅡ,经RT-PCR扩增prM全长基因片段插入pMD18-T-vector中,形成含有正向序列的重组质粒pMD18-T-prM。限制性内切酶NheⅠ和KpnⅠ分别酶切重组质粒pMD18-T-prM和重组质粒pcDNA-asprM,得到片段prM和线性化载体pcDNA-asprM,连接构建成含有prM反向重复序列的重组质粒pcDNA-irRNA。筛选的阳性重组质粒pcDNA-irRNA用脂质体法转染至BHK-21细胞中,半定量PCR和实时荧光定量PCR分析评估该质粒抑制登革病毒复制的效果。结果成功构建具有prM反向重复序列的重组质粒pcDNA-irRNA。经转染pcDNA-irRNA的实验组与未转染质粒阳性对照组相比,半定量PCR结果显示DENV-2攻击96 h后NS3的mRNA表达水平下降28%;实时定量PCR分析显示,DENV-2攻击72 h后实验组病毒拷贝数比阳性对照组少1.44倍,攻击96 h后实验组的NS1表达量明显低于阳性对照组(P0.05)。结论 DENV-2 prM反向重复序列具有干扰病毒复制的效果,为登革病毒基因疫苗的研究提供理论依据。
【作者单位】： 南方医科大学公共卫生与热带医学学院病原生物学系;
【关键词】： 登革Ⅱ型病毒 前膜蛋白 反向重复序列 RNA干扰 BHK-细胞
【基金】：国家自然科学基金(30972566,81271880)~~
【分类号】：R373
【正文快照】： 登革热是一种由蚊媒传播登革热病毒(DENV)引起的蚊媒传染病，，病死率较高，主要流行于热带和亚热带地区”一2!。DENV是一种有包膜的单股正链RNA病毒，基因组全长约1 1 kb，含单一的开放阅读框，依次编码3种结构蛋自(C、prM和E)和7种非结构蛋自(NSI、NSZA、NSZB、NS3、NS4A、NS4

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【二级参考文献】

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本文编号：1106292