人脐静脉内皮细胞培养方法的改进

发布时间：2017-10-30 16:02

  本文关键词：人脐静脉内皮细胞培养方法的改进

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【摘要】：目的建立高效、可靠、经济的人脐静脉内皮细胞原代培养方法,为体外研究血管内皮细胞提供实验手段。方法取健康剖腹产新生婴儿脐带,立即用0.1%Ⅰ型胶原酶室温消化,得血管内皮细胞,置于5%CO2、37℃培养箱进行原代培养,培养基采用M199培养基,含有10%胎牛血清、2 mmol/L谷氨酰胺、50μg/ml肝素钠、10 u/mlbFGF(贝复济,牛碱性成纤维细胞生长因子,basic fibro blast growth factor)、100 u/ml青霉素、50 u/ml庆大霉素。在倒置显微镜下观察原代及传代细胞的形态特点,同时用免疫组织化学的方法对所得细胞进行鉴定。结果采用0.1%Ⅰ型胶原酶灌注法及改良培养基获得了相当数量的人脐静脉内皮细胞。光镜下观察见大量3~4个成团的内皮细胞。细胞接种后4 h开始贴壁生长,5 d左右可融合成片,原代细胞呈小三角形、圆形或梭形,细胞分布不均匀,成簇生长,互不重叠;传代细胞多为扁平多角形铺路石状镶嵌排列,3 d左右可融合成片。免疫组化可见内皮细胞胞浆中人第Ⅷ因子相关抗原呈阳性反应。结论Ⅰ型胶原酶灌注法是获得脐静脉内皮细胞的一种可取方法,成功率高,可靠性大。改良培养基能很好地促进内皮细胞体外培养及传代扩增,可成功构建体外研究血管内皮细胞的模型。
【作者单位】： 福建中医药大学附属宁德市医院;
【关键词】： 人脐静脉内皮细胞 鉴定 细胞培养
【基金】：福建省卫生厅青年科研课题(2011-1-45) 宁德市科学技术计划项目(20110008),细胞分子生物学实验室(一级)
【分类号】：R329
【正文快照】： 糖尿病血管病变(Diabetic vasculopathy)是常见的糖尿病并发症之一,也是导致糖尿病病人死亡的主要原因之一,多种因素参与了这一病理过程,其中血管内皮细胞功能紊乱是主要的发病机制[1,2]。因此,建立血管内皮细胞模型,研究内皮细胞功能变化与糖尿病血管病变的关系以及药物对血

【参考文献】

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【二级参考文献】

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【相似文献】

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本文编号：1118299