刚地弓形虫苹果酸脱氢酶基因的克隆表达及免疫原性分析

发布时间：2017-10-31 19:38

  本文关键词：刚地弓形虫苹果酸脱氢酶基因的克隆表达及免疫原性分析

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【摘要】：目的克隆、表达刚地弓形虫苹果酸脱氢酶(TgMDH)基因,并分析其免疫原性。方法提取弓形虫RH株速殖子总RNA,根据TgMDH的基因编码序列(GenBank登录号为AY650028)设计引物,RT-PCR扩增产物双酶切后连接入pET30a(+)载体,重组质粒转化入大肠埃希菌(E.coli)DH5α,经双酶切、PCR和测序鉴定阳性菌落。重组质粒pET30a(+)-TgMDH转化至E.coli BL21,经异丙基β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)结合考马斯亮蓝染色检测表达产物。优化表达条件,获得大量可溶性蛋白。经镍亲和层析法纯化后滴鼻免疫BALB/c小鼠,制备小鼠抗重组rTgMDH蛋白血清。分别以小鼠抗rTgMDH血清和兔抗弓形虫血清为一抗,蛋白质印迹(Western blotting)分析rTgMDH蛋白的免疫原性。结果 TgMDH基因RT-PCR扩增产物约为951 bp。经双酶切、PCR和测序结果显示重组质粒pET30a(+)-TgMDH构建成功。SDS-PAGE结果显示,经IPTG诱导获得相对分子质量(M_r)约36 000的可溶性重组蛋白。Western blotting分析结果显示,rTgMDH蛋白能被该蛋白免疫的小鼠血清和兔抗弓形虫血清识别。结论本研究克隆的TgMDH基因序列能在原核表达系统中高效表达,且具有免疫原性。
【作者单位】： 徐州医学院病原生物学与免疫学教研室;山西医科大学寄生虫学教研室;
【关键词】： 刚地弓形虫 苹果酸脱氢酶 原核表达 免疫原性
【分类号】：R382.5
【正文快照】： 中国寄生虫学与寄生虫病杂志2013年2月第31卷第1期Chin JP~i*01 Parasit Di，Feb.2013，Vol.31，No.I·13·刚地弓形虫(Tox叩loma gondii，，介)是一种专性细胞内寄生原虫，可感染人和温血动物，侵人几乎所有的有核细胞，引起人兽共患弓形虫病。该病的广泛流行严重危害人类健康

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