蛋白激酶D1在烟曲霉介导的NF-κB信号通路激活及转录活性中的作用

发布时间：2017-10-31 20:27

  本文关键词：蛋白激酶D1在烟曲霉介导的NF-κB信号通路激活及转录活性中的作用

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【摘要】：目的研究蛋白激酶D1(PKD1)在烟曲霉介导的NF-κB信号通路激活及转录活性中的作用,为进一步探讨PKD1在烟曲霉感染引起的肺曲霉病中的作用及其机制奠定基础。方法首先将GFP、GFP-PKD1表达质粒分别转染人肺腺癌细胞A549和HEK293细胞中,分别将灭活的烟曲霉分生孢子(1×105CFU/ml)于不同时间处理上述两组细胞,Western blotting证实PKD1的过表达,并检测PKD1的磷酸化活性;其次在A549细胞中分别转染GFP-PKD1、siRNA-PKD1并以灭活的烟曲霉分生孢子处理细胞30 min,分别检测下游NF-κB通路相关信号分子的磷酸化活性;最后,将NF-κB-luc荧光素酶报告基因及内参照报告质粒海肾荧光素酶(pRL-SV40)共转染入表达GFP、GFP-PKD1的A549细胞中,两组细胞在有无烟曲霉分生孢子的作用下处理24 h,收集细胞裂解液,进行双色荧光素酶活性检测。结果 Western blotting证实PKD1的过表达时间依赖性地增强烟曲霉刺激的A549细胞和HEK293细胞中PKD1的磷酸化活性及NF-κB通路中IКB和p65(pS276)的磷酸化活性,反之,敲低PKD1的表达则抑制烟曲霉介导的NF-κB通路中IКB和p65(pS276)的磷酸化活性。过表达PKD1明显增加NF-κB-luc荧光素酶的转录激活活性。结论 PKD1可能在烟曲霉刺激的NF-κB通路的激活及转录活性中起重要作用。
【作者单位】： 南方医科大学基础医学院细胞生物学教研室;南方医科大学骨科研究所;南方医科大学南方医院检验科;
【关键词】： 蛋白激酶D 烟曲霉分生孢子 NF-κB 转录激活 磷酸化
【基金】：国家自然科学基金(30973014,81272852) 广东省自然科学基金(10151051501000040);广东省自然科学基金博士启动基金(9451051501003704)~~
【分类号】：R378
【正文快照】： 随着广谱抗生素与免疫抑制剂的广泛使用,真菌感染在临床感染类型中呈逐年增加的趋势,而烟曲霉感染已成为仅次于白色念珠菌的一种重要感染类型[1]。烟曲霉菌在空气中广泛存在,免疫系统正常的个体吸入不致病,而免疫系统受损的个体吸入可导致侵袭性肺曲酶病,致死率极高[2]。蛋白

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前2条

1 刘金辉;杨芬;罗闳丹;陈志平;谢小梅;;NF-κB启动的炎症反应在小鼠侵袭性肺曲霉病肺损伤中的作用[J];微生物学通报;2008年11期

2 李祥;罗闳丹;石青;谢小梅;刘金辉;;小鼠侵袭性肺曲霉病发病过程中TLRs/NF-κB信号通路的激活[J];中国免疫学杂志;2010年10期

【共引文献】

中国期刊全文数据库 前3条

1 卢鑫;孙文逵;吴晓东;苏欣;施毅;张秀伟;;气管插管法建立免疫抑制小鼠侵袭性肺曲霉病模型[J];医学研究生学报;2012年04期

2 华锋;余克花;周艳;刘金辉;;小鼠肺组织中肿瘤坏死因子α水平的变化与真菌机会性感染的关系[J];南昌大学学报(医学版);2011年05期

3 石青;李祥;罗闳丹;刘金辉;谢小梅;;烟曲霉菌感染小鼠肺组织中NOD1信号通路的激活[J];免疫学杂志;2010年05期

中国硕士学位论文全文数据库 前2条

1 陈志平;NF-κB/TNF-α信号通路对小鼠侵袭性肺曲霉病的影响[D];南昌大学;2009年

2 卢鑫;卡泊芬净雾化吸入防治侵袭性肺曲霉病药效学与安全性的动物实验研究[D];南京大学;2012年

【二级参考文献】

中国期刊全文数据库 前1条

1 罗闳丹;施e，

本文编号：1123628