小鼠BTLA慢病毒表达载体的构建及鉴定

发布时间：2017-11-01 23:04

  本文关键词：小鼠BTLA慢病毒表达载体的构建及鉴定

  更多相关文章： 慢病毒 B、T淋巴细胞弱化因子 T细胞 PCR技术

【摘要】：目的构建小鼠BTLA慢病毒表达载体,并对表达产物进行鉴定。方法以pET-28a-mBTLA质粒为模板,通过PCR技术构建pMD18-T-mBTLA质粒,将小鼠BTLA基因全长编码序列克隆到慢病毒转移载体,通过脂质体转染293T细胞包装成小鼠BTLA慢病毒颗粒。PCR技术和基因测序对重组质粒进行鉴定。荧光显微镜观察重组慢病毒感染293T细胞形态学变化。RT-PCR和Western blot法鉴定BTLA在重组慢病毒感染293T细胞中的表达。50%组织培养感染剂量法(TCID50法)检测重组慢病毒滴度。结果成功构建的pMD18-T-mBTLA质粒和pSL6-mBTLA质粒,经双酶切电泳后均出现大小约为1 kb的条带与mB-TLA编码序列的大小相符。基因测序并比对分析进一步证实mBTLA编码序列成功整合到质粒载体。病毒上清PCR扩增和293T细胞形态学观察证实Lenti-mBTLA慢病毒包装成功。TCID50法测定Lenti-mBTLA慢病毒滴度为1.3×108pfu/mL。RT-PCR和Western blot法证实Lenti-mBTLA慢病毒能有效表达mBTLA mRNA和蛋白质。结论成功构建了表达小鼠BTLA的慢病毒。
【作者单位】： 广东医学院检验医学研究所;广东医学院临床免疫学教研室;
【关键词】： 慢病毒 B、T淋巴细胞弱化因子 T细胞 PCR技术
【基金】：国家自然科学基金(30971779,81273237) 广东省科技计划项目(2009B030801333) 广东医学院青年科学基金项目(XQ1124)
【分类号】：R363
【正文快照】： B、T淋巴细胞弱化因子(B and T lymphocyteattenuator,BTLA)是CD28家族成员,由含单一Ig结构域的胞外段和含1个近膜的免疫受体酪氨酸抑制性基序(immunoreceptor tyrosine-based inhibitory mo-tifs,ITIM)和1个远膜的免疫受体酪氨酸活化基序(immunoreceptor tyrosine-based acti

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前1条

1 徐军发;赵坤;黄保军;熊平;方敏;沈关心;龚非力;;小鼠BTLA胞外功能区基因克隆表达及其对DC表面B7分子表达的影响[J];细胞与分子免疫学杂志;2006年04期

【共引文献】

中国期刊全文数据库 前3条

1 徐军发;赵坤;;B/T细胞弱化分子—CD28超家族一个新的共抑制分子的研究进展[J];国际免疫学杂志;2007年06期

2 刘伟;郑淑华;吕晶;鲍晶晶;王红梅;关向前;张慧;徐军发;;检测人可溶性疱疹病毒侵入介体双抗体夹心ELISA的建立[J];细胞与分子免疫学杂志;2011年09期

3 徐军发;赵坤;黄保军;熊平;冯玮;徐勇;方敏;郑芳;龚非力;;可溶性小鼠BTLA对树突状细胞表面B7-1和B7-2表达的影响[J];中华微生物学和免疫学杂志;2006年12期

中国博士学位论文全文数据库 前2条

1 徐军发;重组sCD83和sBTLA对DC活性及sCD83对同种皮肤移植物存活的影响[D];华中科技大学;2006年

2 傅振坤;B及T淋巴细胞弱化因子（BTLA）基因多态性与黑龙江省妇女乳腺癌发病风险的试验研究[D];哈尔滨医科大学;2010年

【二级参考文献】

中国期刊全文数据库 前2条

1 吴东,沈锋,娄永华,焦炳华,吴孟超;人LIGHT基因的克隆及其重组腺病毒载体的构建[J];细胞与分子免疫学杂志;2002年02期

2 费世江,吴雄文,翁秀芳,蔡蕾,梁智辉,韩军艳,龚非力;预先形成的重链二硫键有助于HLA-A2-抗原肽复合物体外折叠[J];细胞与分子免疫学杂志;2005年02期

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 糜祖煌;PCR技术在肿瘤诊治中的应用[J];中国优生与遗传杂志;1993年02期

2 邓可刚;用文献计量学分析聚合酶链反应技术的发展[J];医学情报工作;1994年05期

3 苏明权,祝道成,穆士杰,丁振若;PCR技术在临床检验中的质量保证[J];陕西医学检验;1995年01期

4 陈悦，，佟彤;应用多聚酶链反应（PCR）技术对EB病毒检测[J];中国优生与遗传杂志;1996年03期

5 傅杰青,禹宽平;众说纷纭话1997年诺贝尔医学奖(待续)(五)主要论敌──“病毒说”(上)[J];医学与哲学;1999年06期

6 董莹;聚合酶链反应改良技术及其用途[J];中国寄生虫病防治杂志;2001年01期

7 唐永姣,曲红梅,张宏,苗克军,王世明;应用PCR技术检测鼠疫菌及动物脏器的试验观察[J];地方病通报;2003年04期

8 朱宇宁,吕时铭;差异显示PCR技术在念珠菌基因表达研究中的应用[J];浙江大学学报(医学版);2005年02期

9 孙黎,张永振,李莹,陈化新;PCR技术在汉坦病毒研究中的应用[J];中国人兽共患病杂志;2005年06期

10 李松南;毛晓波;冯义柏;王祥;曾秋棠;毛奕;吉庆伟;彭昱东;郭敏;梁志山;;大鼠Cx43基因慢病毒表达载体的构建及转染骨髓间充质干细胞表达的观察[J];临床心血管病杂志;2010年11期

中国重要会议论文全文数据库 前10条

1 陈

本文编号：1128886