干细胞标志Musashi2基因RNAi腺病毒载体的构建及鉴定

发布时间：2017-11-04 09:04

  本文关键词：干细胞标志Musashi2基因RNAi腺病毒载体的构建及鉴定

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【摘要】：目的:构建人干细胞标志分子Musashi2(Msi2)RNAi腺病毒载体,并检测其在膀胱癌细胞株BIU87中的干扰效果及对细胞增殖的影响。方法:将2对干扰片段msi2-1和msi2-2及阴性对照scramble片段克隆入pSES-HUS穿梭载体,经酶切鉴定及测序后,将测序正确的克隆经PmeⅠ酶切后与pAdeasy-1骨架质粒在BJ5183菌内重组,重组质粒经PacⅠ酶切后转染入293A细胞,进行腺病毒的包装和扩增。Real-time PCR和Western blotting法分别检测腺病毒感染BIU87细胞后Msi2的mRNA和蛋白表达水平,MTT实验检测干扰Msi2对BIU87细胞增殖的影响。结果:成功将干扰片段和scramble片段克隆入pSES-HUS穿梭载体,构建出pAdeasy-1-pSES-HUS-msi2和pAdeasy-1-pSES-HUS-scramble重组腺病毒载体并包装扩增出腺病毒。与scramble组比较,msi2-1和msi2-2组的Msi2mRNA和蛋白表达水平均明显下降(P0.05)。干扰Msi2后,BIU87细胞增殖能力下降(P0.05)。结论:成功构建Msi2RNAi腺病毒载体,其可有效抑制膀胱癌细胞株BIU87内Msi2的表达并抑制细胞增殖。
【作者单位】： 重庆医科大学检验医学院临床检验诊断学教育部重点实验室重庆市重点实验室;
【基金】：重庆市科学技术委员会自然科学基金资助课题(CSTC,2010BB5363)
【分类号】：R373
【正文快照】： Musashi(Msi)是干细胞自我更新和保持多潜能特性必不可少的分子,参与调节干细胞的分化发育[1]。已有研究表明:Msi在多种肿瘤中也高表达,参与肿瘤的发生发展。Msi是1994年在果蝇的神经系统研究中最早被发现,包含2个成员:Msi1和Msi2,两者高度同源[2]。Msi1基因在肿瘤细胞中的作

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本文编号：1138727