超声辅助酶切法用于溶液内蛋白质样品酶切特点分析

发布时间：2017-11-04 16:23

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【摘要】：目的分析超声辅助酶切法对溶液内蛋白质样品酶切的特点。方法分别应用超声辅助酶切法与传统酶切法对牛血清白蛋白进行溶液内酶切,通过飞行时间质谱进行分析,对数据库检索后得到的多肽进行比较分析。结果超声辅助酶切法的酶切时间可缩短到10 min,酶切后多肽的回收率比传统酶切法低8%,但飞行时间质谱鉴定评分(MASCOT评分)比传统方法高约1倍,肽段的覆盖率高10%,匹配的多肽数多40%以上。对超声辅助酶切法鉴定出的多肽进一步分析表明,这些多肽的误切率较传统方法高22%,比传统方法多鉴定出的多肽分子质量主要在2～3 ku之间,且大部分为含有误切位点的多肽。结论超声辅助酶切可明显缩短蛋白质酶切时间,得到更好的多肽鉴定,但部分多肽酶切不完全,样品损失会更多。
【作者单位】： 中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院中心实验室;
【基金】：国家自然科学基金(30970650)
【分类号】：R341
【正文快照】： 目前应用质谱进行蛋白质组研究需要将蛋白质酶切成多肽片段,再进行质谱分析,通过数据库检索实现蛋白质组的大规模鉴定[1]。但是在这个过程中,传统酶切法耗时长,往往需要16 h以上,极大的限制了蛋白质组分析的通量。超声辅助酶切法利用超声波辅助进行酶切,可以在几分钟内实现蛋

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本文编号：1140189