多效生长因子基因转染小鼠脂肪来源干细胞的实验研究

发布时间：2017-11-08 06:07

  本文关键词：多效生长因子基因转染小鼠脂肪来源干细胞的实验研究

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【摘要】：目的探讨多效生长因子基因(pleiotrophin,Ptn)转染小鼠脂肪来源干细胞(adipose-derived stem cells,ADSCs)作为组织工程血管的重建种子细胞的可行性,并检测其基因表达,为缺血性病损治疗提供新手段。方法取3只清洁级近交系C57BL/6W雌性小鼠(体重15～20 g)腹股沟皮下脂肪,采用酶消化法体外分离、培养ADSCs,流式细胞仪行细胞表面标志物CD29、CD44鉴定。实验分为转染pIRES2-LEGFPN1组(含Ptn基因编码序列,A组)和转染pLEGFP-N1负对照组(含GFP基因编码序列,B组)。ADSCs转染后,A组以最佳筛选浓度200μg/mL的G418对转染后细胞进行筛选,流式细胞仪鉴定转染后细胞免疫表型。实时荧光定量PCR、Western blot检测A、B组细胞Ptn基因和PTN蛋白表达。结果实验成功分离、培养小鼠ADSCs;细胞表面标志物CD29、CD44阳性率分别达99.5%、95.8%,双阳性率达93.6%。A组转染Ptn后细胞表面标志物CD29、CD44阳性率分别达99.1%、95.6%,双阳性率达93.4%。实时荧光定量PCR、Western blot检测示,A组Ptn基因和PTN蛋白相对表达水平均显著高于B组(P0.05)。结论 Ptn基因能转染小鼠ADSCs并高表达PTN蛋白,为组织工程血管构建种子细胞选择提供了新思路。
【作者单位】： 成都中医药大学附属医院中心实验室;四川大学华西第二医院Alan
【基金】：四川省科技厅科技支撑计划项目(4160220)~~
【分类号】：R329
【正文快照】： 自上世纪60年代Kleinsmith等[1]从小鼠睾丸畸胎癌中分离出胚胎干细胞以来,从早期的胚胎干细胞[2]到成体干细胞[3]、核移植干细胞[4],再到近期的诱导干细胞[5],干细胞研究取得了很大进展。基因修饰干细胞移植治疗是近年来治疗多种疾病的新方法[6]。该方法是以干细胞为载体,在

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