HCV核心蛋白对HepG2细胞增殖的影响

发布时间：2017-11-08 07:14

  本文关键词：HCV核心蛋白对HepG2细胞增殖的影响

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【摘要】：目的利用腺病毒表达系统,研究丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)核心蛋白对HepG2细胞增殖、Wnt1以及microRNA152(miR-152)表达水平的影响。方法通过HEK293细胞扩增腺病毒获得高滴度的Ad-EGFP和Ad-HCVcore,分别感染HepG2细胞后,通过RT-PCR和Western blot证实HCV核心蛋白在HepG2细胞中高效表达。MTT法、细胞周期测定和克隆形成实验检测HCV核心蛋白对HepG2细胞增殖的影响。SYBR探针荧光定量PCR和Western blot检测的HepG2-HCV core细胞中Wnt1和miR-152表达的变化。用miR-152 inhibitor转染HepG2细胞后,SYBR探针荧光定量PCR、Western blot检测HepG2细胞中Wnt1 mRNA和蛋白表达水平变化。结果 Ad-GFP和Ad-HCV core腺病毒经HEK293扩增后滴度分别为1.5×109pfu/mL和1.6×1010pfu/mL。Ad-HCV core腺病毒感染HepG2细胞后,HCV核心蛋白高效表达。感染48 h后,与HepG2-Mock细胞相比,Ad-HCV core可显著促进HepG2细胞增殖(P0.05),加快G1/S细胞周期进展(P0.05),并促进细胞克隆形成(P0.05)。Ad-HCV core腺病毒感染可在显著上调HepG2细胞中Wnt1mRNA和蛋白表达量(P0.05)的同时下调miR-152表达水平。同时,miR-152 inhibitor可显著上调Wnt1 mRNA和蛋白水平。进一步生物信息学分析显示,Wnt1基因mRNA 3'-UTR含有miR-152结合位点。结论 HCV核心蛋白可能通过抑制miR-152而减弱其对Wnt1 mRNA的降解及翻译阻碍作用,进而达到上调Wnt1致Wnt信号通路激活,促进肝癌细胞增殖的效应。
【作者单位】： 重庆医科大学附属第一医院检验科;
【基金】：国家自然科学基金(81071621,30973378,81101826,81272545) 重庆市自然科学基金(CSTC2009BB5257,CSTC2010BB5390) 重庆市卫生局基金(2010-2-090) 重庆医科大学附属第一医院医学科学基金(YXJJ 2009-12)~~
【分类号】：R373
【正文快照】： 丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)是丙型肝炎的病原体。在我国HCV人群感染率约为3.2%,全球有1.7亿～2.0亿HCV感染者[1]。丙型肝炎仍然是严重威胁人类健康的重要传染性疾病,感染者中绝大部分(70%～85%)可发展为慢性感染,在许多国家已成为引起肝细胞癌(hepatocellular carci

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4 张s，

本文编号：1156123