膀胱平滑肌细胞条件培养液诱导脐带MSCs向平滑肌细胞分化的实验研究

发布时间：2017-11-08 13:10

  本文关键词：膀胱平滑肌细胞条件培养液诱导脐带MSCs向平滑肌细胞分化的实验研究

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【摘要】：目的探讨膀胱平滑肌细胞(bladder smooth muscle cells,BSMCs)条件培养液能否诱导脐带MSCs(umbilical cord MSCs,UCMSCs)向平滑肌细胞(smooth muscle cells,SMCs)分化,为组织工程技术应用于泌尿系统修复重建寻找可供选择的种子细胞。方法取足月新生儿脐带和行膀胱全切术患者捐赠的正常膀胱组织,分别分离培养UCMSCs和BSMCs。收集第1~5代BSMCs的培养液,与完全培养基以1∶1比例配制成BSMCs条件培养液。取第3代UCMSCs作为诱导细胞,使用BSMCs条件培养液培养为诱导组(A组),完全培养基培养为对照组(B组),倒置显微镜观察两组细胞形态变化;另设单纯BSMCs为阳性对照组(C组)。培养7、14 d,采用免疫荧光染色和Western blot检测各组细胞中α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、Calpon in、平滑肌肌球蛋白重链(smooth muscle myosin heavy chain,SM-MHC)的表达情况。结果诱导培养后,A组细胞逐渐变长,由短棒状、多个突起逐渐转变为长梭形,与BSMCs形状相似;B组细胞形态未见明显变化。免疫荧光染色示,C组BSMCs中α-SMA、Calponin和SM-MHC均呈阳性表达。培养7 d,A、B组可见α-SMA呈阳性表达;14 d时,A组α-SMA阳性表达逐渐增多,B组无明显变化。培养7 d,A组可见Calponin阳性表达,14 d时阳性表达明显增多;B组各时间点均未见Calponin阳性表达。各时间点A、B组均未见SM-MHC阳性表达。Western blot检测示各组细胞α-SMA、Calponin和SM-MHC蛋白表达情况与免疫荧光染色结果基本一致。结论 BSMCs条件培养液能诱导UCMSCs向SMCs分化,UCMSCs有望成为泌尿系统修复重建可供选择的种子细胞之一。
【作者单位】： 四川大学华西医院泌尿外科;
【基金】：国家自然科学基金资助项目(30901484、81200551、81270841)~~
【分类号】：R329.2
【正文快照】： 组织工程技术的发展为人类疾病治疗带来一种“理想”的治疗模式[1]。干细胞具有较强多向分化潜能,是组织工程研究的理想种子细胞。其中MSCs是来自中胚层的干细胞,广泛存在于骨髓、脂肪、肌肉、脐带血、胎盘及脐带等组织中[2-6]。目前研究较深入的是BMSCs,但存在细胞数量及增殖

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本文编号：1157252