拟胚体高密度培养促进小鼠胚胎干细胞向心肌细胞分化

发布时间：2017-11-08 21:40

  本文关键词：拟胚体高密度培养促进小鼠胚胎干细胞向心肌细胞分化

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【摘要】：目的探讨拟胚体(EBs)培养密度对小鼠胚胎干细胞(ESCs)心肌细胞分化的影响。方法小鼠ESCs经过悬滴培养后形成EBs后,以高、低密度(120、60个EBs/60mm组织培养皿)贴壁培养,免疫荧光检测心肌特异性蛋白肌钙蛋白T(TnT)的表达。在不同时间点计算不同密度组搏动EBs百分比;RT-PCR检测Nkx2.5、GATA4、β-MHC及ANF基因表达水平;Western-blot检测TnT及p38表达水平。结果通过悬滴培养法形成的EBs能够出现自发性搏动并且有TnT表达。高密度培养组与低密度培养组相比具有更高的搏动EBs百分比,Nkx2.5、GATA4、β-MHC和ANF基因高表达水平,以及TnT蛋白高表达水平(P0.05)。高密度培养组的p38活性更高,使用p38特异性阻断剂SB203580能够降低高密度组搏动EBs百分比和TnT蛋白表达水平。结论 EBs贴壁培养密度是影响ESCs向心肌细胞分化的一个重要因素,EBs高密度培养相比于低密度培养能够获得更大程度的心肌分化,且该现象可能是由p38信号通路所介导。
【作者单位】： 武汉大学中南医院心内科;南方医科大学神经生物学教研室;
【基金】：国家自然科学基金资助项目(项目编号:81200119) 中央高校基本科研业务费专项资金(项目编号:121007)
【分类号】：R329
【正文快照】： 胚胎干细胞(embryonic stem cells,ESCs)具有多向分化潜能,能够分化成外胚层、中胚层和内胚层3个胚层的多种细胞,包括中胚层的心肌细胞。ESCs源性的心肌细胞已经用于心肌梗死和病态窦房结综合征动物模型的移植[1-2]。体外通过形成拟胚体(em bryoid bodies,EBs)促进ESCs向心肌

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