环介导恒温扩增法对嗜麦芽寡养单胞菌L2型头孢菌素β内酰胺酶基因的快速检测

发布时间：2017-11-09 18:30

  本文关键词：环介导恒温扩增法对嗜麦芽寡养单胞菌L2型头孢菌素β内酰胺酶基因的快速检测

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【摘要】：目的建立快速检测L2型头孢菌素β内酰胺酶的方法。方法利用DNA环介导恒温核酸扩增法(loopmediated isothermal amplification of DNA,LAMP)针对L2型头孢菌素β内酰胺酶基因设计的5条特异性引物,通过引物特异性识别特定Bla L2基因上的7个独立区域实现耐碳青霉烯类嗜麦芽寡养单胞菌的检测。实时浊度仪监测反应结果表明,LAMP反应在65℃恒温条件下50 min内完成;钙黄绿素可视化检测表明阳性结果呈绿色,与阴性结果差异显著。结果 LAMP法最低检出基因的浓度为2.58 pg/μl,其灵敏度为PCR法的100倍,且具有良好的特异性。结论 LAMP法具有过程简单、实验装置简便、结果肉眼可辨别、灵敏度高、特异性强等特点,对非L2型头孢菌素β内酰胺酶基因的结果呈阴性,适用于临床L2型头孢菌素β内酰胺酶基因的快速检测。
【作者单位】： 辽宁医学院附属第一医院呼吸科;军事医学科学院疾病预防控制所;军事医学科学院附属医院呼吸科;
【基金】：国家自然科学基金资助项目(81071399,81271887) 首都医学发展研究基金资助项目(2009-3071)
【分类号】：R446.5;R378.99
【正文快照】： 嗜麦芽寡养单胞菌(Stenotrophomonas maltophilia,SMA)是一种全球流行的革兰阴性MDRO(新型多重药物抵抗有机体)[1],可引起人体呼吸道感染。SMA产生至少两种β-内酰胺酶,主要为L1型和L2型[3],是导致细菌对β-内酰胺类抗生素耐药的主要机制[2]。L2型为具有丝氨酸活性位点的头孢

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