抗卵泡刺激素受体纳米抗体的制备及鉴定

发布时间：2017-11-10 17:12

  本文关键词：抗卵泡刺激素受体纳米抗体的制备及鉴定

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【摘要】：目的获得抗卵泡刺激素受体(FSHR)的纳米抗体。方法使用原核表达的重组蛋白His-FSHR234对新疆双峰驼单域抗体噬菌体展示文库进行亲和筛选,将筛选获得的重链抗体的可变区(vhh)基因亚克隆至pET30a表达载体,转化E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达VHH重组蛋白,镍离子亲和层析柱纯化获得纳米抗体。ELISA检测纳米抗体的抗原结合活性。结果 His-FSHR234筛选富集后,随机挑选40个克隆进行鉴定,其中28个为阳性克隆,挑选4个vhh基因进行克隆,PCR和酶切鉴定目的基因大小与预计相符。SDS-PAGE显示,VHH FSHR-06、VHH FSHR-25、VHH FSHR-30、VHH FSHR-50分别在相对分子质量(M r)31 000、26 000、25 000、26 000有目的条带。ELISA检测显示,4个纳米抗体对His-FSHR234重组蛋白均具有结合活性,其中VHH FSHR-06的抗原结合活性最高。结论从新疆双峰驼单域抗体噬菌体展示文库中筛选获得了1个具有较高抗原结合活性的抗FSHR的纳米抗体。
【作者单位】： 新疆大学生命科学与技术学院 新疆生物资源基因工程重点实验室;
【基金】：新疆自治区高技术研究发展项目(201110102) 国家自然科学基金(81260333)
【分类号】：R392.1
【正文快照】： 卵泡刺激素受体(follicle-stimulating hormone re-ceptor,FSHR)是一种跨膜糖蛋白,属于G蛋白偶联受体超家族中的糖蛋白亚家族成员。在成年人和动物中,FSHR仅特异性表达在睾丸支持细胞和卵巢粒层细胞表面,并且低表达于睾丸和卵巢血管内皮细胞[1]。先前对FSHR与肿瘤相关的研究主

【参考文献】

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本文编号：1167565