人p21活化激酶6基因截短区域的GST标签原核表达质粒的构建及其重组蛋白的表达

发布时间：2017-11-12 07:13

  本文关键词：人p21活化激酶6基因截短区域的GST标签原核表达质粒的构建及其重组蛋白的表达

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【摘要】：目的:构建人p21活化激酶6(PAK6)的各个截短区域原核表达质粒,并诱导和鉴定其融合蛋白的表达,为探讨PAK6基因的生物学功能提供依据。方法:以真核表达质粒pcDNA3.1-GFP-PAK6为模板,PCR扩增出PAK6基因的各个截短片段。所获得的各截短片段经EcoRⅠ/XhoⅠ双酶切后克隆至GST标签的原核表达载体pGEX-5X-1中。将构建的PAK6各截短质粒转化入E.coli BL21中,采用IPTG诱导PAK6基因截短融合蛋白表达,采用Western blotting法鉴定PAK6基因截短融合蛋白的表达。结果:EcoRⅠ/XhoⅠ双酶切后得到与预期大小相符的载体片段(5 000bp)和PAK6 1-55(165bp)、PAK6 56-210(465bp)、PAK6 211-410(600bp)及PAK6 385-681(891bp)4个片段。Western blotting检测,PAK6各截短区域质粒GST-PAK6截短融合蛋白相对分子质量分别为32 000、43 000、48 000和60 000。结论:成功构建PAK6基因各个截短区域GST标签原核表达质粒并表达其重组蛋白。
【作者单位】： 中国医科大学基础医学院细胞生物学教研室教育部医学细胞生物学重点实验室;中国医科大学;
【基金】：国家自然科学基金资助课题(31171360)
【分类号】：R346
【正文快照】： 人p21活化激酶(p21-activated kinase,PAK)是保守的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,PAK为Rho家族小鸟苷三磷酸酶(Rho-GTPase)Cdc42/Rac1下游重要的靶蛋白,参与许多重要的细胞活动,如细胞骨架重建、细胞移动/迁移、细胞凋亡与生存和细胞周期与有丝分裂,而且与肿瘤细胞的侵袭转移密切关

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