靶向UL27shRNA抑制Ⅱ型单纯疱疹病毒在HEK293细胞中的复制

发布时间：2017-11-12 22:04

  本文关键词：靶向UL27shRNA抑制Ⅱ型单纯疱疹病毒在HEK293细胞中的复制

  更多相关文章： RNA干扰 Ⅱ型单纯疱疹病毒 UL基因

【摘要】：按照shRNA(small hairpin RNA)设计原则,针对Ⅱ型单纯疱疹病毒(herpes simplex virus type2,HSV-2)的UL27基因序列保守区域筛选设计、合成4条干扰靶序列并构建表达UL27序列特异性siRNA(short interfering RNA)的质粒载体pGPU6/GFP/Neo.通过脂质体介导重组表达载体转染HEK293细胞(human embryonic kidney 293 cell)再接种HSV-2.采用实时荧光定量PCR(real-timefluorescent quantitative PCR)技术检测UL27各组的mRNA转录水平,终点滴定法检测细胞上清液中的病毒滴度,四甲基偶氮唑盐(four methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)法测定细胞存活率,Western印迹法检测蛋白表达效果.结果显示,UL27shRNA75组对UL27基因mRNA表达抑制效果最佳,同时能显著抑制感染细胞的CPE(cytopathic effect,CPE),降低上清液中的病毒感染滴度,提高细胞的生存率,抑制UL27基因的蛋白表达.提示本研究构建的pGPU6/GFP/Neo-UL27表达载体能在细胞水平上不同程度地干扰HSV-2 UL27基因表达,抑制HSV-2在HEK293细胞中复制.
【作者单位】： 遵义医学院珠海校区、生化教研室;
【基金】：贵州省科学技术基金(黔科合J字No.[2008]2313号) 贵州省优秀科技教育人才省长专项资金项目(黔省专合字No.(2009)122号)资助~~
【分类号】：R373
【正文快照】： Ⅱ型单纯疱疹病毒(herpes simplex virus type 2,HSV-2)是生殖器疱疹(genital herpes,GH)的主要病原体.HSV-2一旦感染将终身潜伏在骶神经节[1-2].近年来的研究认为,Ⅱ型单纯疱疹病毒感染和艾滋病[3]、宫颈癌的发病密切相关性[4-7].国内外研究显示,HSV-2患病率呈不断上升趋势[8

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前2条

1 冯海;张浩;屠静;罗凌琪;周琦;彭宜红;;敲减单纯疱疹病毒Ⅱ型(HSV-2)UL30蛋白表达可抑制HSV-2复制[J];中国生物化学与分子生物学报;2007年12期

2 周琦;张浩;王波;彭宜红;屠静;朱萌;徐萍;;下调细胞P21~(WAF1/CIP1)基因表达可抑制单纯疱疹病毒Ⅱ型复制[J];中国生物化学与分子生物学报;2009年04期

【共引文献】

中国期刊全文数据库 前5条

1 屠静;张浩;周琦;王波;曹眸;黄海;彭宜红;;细胞MEK1/2蛋白及其相关通路在单纯疱疹病毒Ⅱ型(HSV-2)复制中的作用[J];中国生物化学与分子生物学报;2008年09期

2 周琦;张浩;王波;彭宜红;屠静;朱萌;徐萍;;下调细胞P21~(WAF1/CIP1)基因表达可抑制单纯疱疹病毒Ⅱ型复制[J];中国生物化学与分子生物学报;2009年04期

3 王波;丁丽新;邓娟;张浩;朱萌;易婷;刘静;徐萍;鲁凤民;彭宜红;;MEK1/2抑制剂U0126抑制肠道病毒71型的复制[J];中国生物化学与分子生物学报;2010年06期

4 孙婷;苏文莉;白吉伟;凌焱;袁静;李咏梅;何湘;;p21对MAVS通路的调节[J];细胞与分子免疫学杂志;2011年08期

5 潘晓瑜;吕延成;王志勇;樊俊;周丹丹;袁俊杰;;靶向UL5小干扰RNA对Ⅱ型单纯疱疹病毒的抑制[J];中国组织工程研究;2012年37期

中国博士学位论文全文数据库 前1条

1 姜龙;鸭瘟病毒UL49基因功能研究[D];四川农业大学;2012年

【二级参考文献】

中国期刊全文数据库 前3条

1 冯海;张浩;屠静;罗凌琪;周琦;彭宜红;;敲减单纯疱疹病毒Ⅱ型(HSV-2)UL30蛋白表达可抑制HSV-2复制[J];中国生物化学与分子生物学报;2007年12期

2 屠静;张浩;周琦;王波;曹眸;黄海;彭宜红;;细胞MEK1/2蛋白及其相关通路在单纯疱疹病毒Ⅱ型(HSV-2)复制中的作用[J];中国生物化学与分子生物学报;2008年09期

3 罗凌琪;屠静;冯海;张浩;彭宜红;;细胞ERK信号通路对单纯疱疹病毒Ⅱ型增殖复制的影响[J];中华微生物学和免疫学杂志;2007年09期

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 叶礼红;舒晓春;邬伟民;鲁红云;孟晓军;孙辽;;TIEG特异的siRNA慢病毒载体的构建及鉴定[J];中国现代医学杂志;2009年17期

2 吕碧涛;袁文;徐盛明;刘百峰;曹莉;;大鼠Nogo受体基因RNA干扰慢病毒载体的构建与鉴定[J];第二军医大学学报;2007年01期

3 贾俊涛;陈立军;赵明秋;琚春梅;吕英然;陈金顶;;口蹄疫病毒VP1基因siRNA重组腺病毒的构建及其介导的RNAi抑制口蹄疫病毒复制的研究[J];中国兽医杂志;2010年01期

4 曹婷婷;张茂林;赵国强;卢滨;王静;;靶向Akt2基因RNA干扰重组表达载体的构建和测序[J];山东医药;2008年28期

5 崔勇;陈静;王君玉;王麒;胡国汉;骆纯;卢亦成;;AKT2基因短发夹结构RNA慢病毒载体的构建及鉴定[J];现代生物医学进展;2011年08期

6 单志新;林秋雄;谭虹虹;邓春玉;刘晓颖;肖定璋;余细勇;;利用双萤光素酶报告基因系统筛选有效的siRNA[J];南方医科大学学报;2009年08期

7 黄纯海;李学军;罗勇;黄军;袁贤瑞;;人EGFL7基因短发夹结构RNA慢病毒载体的构建及鉴定[J];中华神经外科疾病研究杂志;2009年06期

8 陈波;李建平;戴途;吴志勇;罗蒙;孙勇伟;;CRBP-1基因RNAi慢病毒载体的构建与鉴定[J];南通大学学报(医学版);2007年06期

9 张学智;山长亮;叶丽虹;张晓东;;RNA干扰在抗乙肝治疗中的应用及其研究进展[J];生物化学与生物物理进展;2008年06期

10 阮坚丽;高源;管文贤;乔志明;钱伟峰;;信号转录激活子3基因shRNA慢病毒载体的构建与鉴定[J];南通大学学报(医学版);2010年02期

中国重要会议论文全文数据库 前10条

1 杨英;杜金伟;祝毓琳;朱平;;MLL基因特异性siRNA抑制Hox基因表达[A];第四届全国RNA进展研讨会论文集[C];2005年

2 薛凯;李梅;刁飞扬;凌静;崔毓桂;刘嘉茵*;;小鼠NR4A1基因siRNA重组腺病毒载体的构建与鉴定[A];江苏省遗传学会第七届二次代表大会暨学术研讨会论文摘要汇编[C];2008年

3 李江南;郭焕成;史子学;涂长春;;逆转录病毒载体介导shRNA抑制猪瘟病毒增殖的研究[A];中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第三届猪病防控学术研讨会论文集[C];2008年

4 张万钰;谭湘陵;;Ttll1干扰质粒的构建及在Neuro-2a细胞中的基因表达抑制效果的观察[A];江苏省遗传学会第七届二次代表大会暨学术研讨会论文摘要汇编[C];2008年

5 李艳;严明;;RNA干扰[A];第一届全国化学工程与生物化工年会论文摘要集(下)[C];2004年

6 母连志;丁壮;丛彦龙;尹仁福;刘美;王昌庆;李少丽;邱蜜蜜;;靶向新城疫病毒P基因利用RNAi技术抑制其在鸡胚成纤维细胞上的复制[A];中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第七届全国会员代表大会暨第十三次学术研讨会论文集（下册）[C];2009年

7 孙新平;马春燕;张捷;崔彬;刘晓雯;辛玮;赵跃然;;人RAGE sh-RNA表达载体的构建及其对前列腺癌细胞RAGE基因表达的抑制作用[A];山东生物化学与分子生物学会2009年学术会议论文汇编[C];2009年

8 赵主江;单云峰;樊红;程欲超;成建;权艳梅;张建琼;谢维;;DNMT3A siRNA稳定表达载体的构建及其沉默效率的鉴定[A];江苏省遗传学会第七届代表大会暨学术研讨会论文摘要汇编[C];2006年

9 丁家波;李延鹏;杨明;李中明;孙爱军;崔治中;;马立克氏病毒1.8-kb mRNA对其上游双向启动子活性的影响[A];首届中国兽药大会——兽医生物制品学、兽医微生物学学术论坛论文集（2008）[C];2008年

10 季朝能;李继喜;郑眉;顾星;;人GMP还原酶的功能结构分析[A];第十次中国生物物理学术大会论文摘要集[C];2006年

中国重要报纸全文数据库 前2条

1 肖京力邋周丽莉 礼彤;结合生物工程技术——超临界流体技术发展应用大有潜力[N];中国医药报;2007年

2 记者 刘钢;德科学家研究“基因开关”[N];新华每日电讯;2001年

中国博士学位论文全文数据库 前10条

1 张守峰;狂犬病病毒的RNA干扰研究[D];吉林大学;2007年

2 王鹏雁;口蹄疫病毒干扰RNA转基因小鼠模型的构建[D];石河子大学;2008年

3 李朝阳;RNA干扰下调cyclin T1蛋白的表达及其对靶细胞和HIV-1的影响[D];武汉大学;2005年

4 王晓龙;小鼠骨骼肌细胞SelW基因的RNA干扰研究[D];东北林业大学;2006年

5 叶中德;RFP13诱导细胞凋亡的调控[D];中国人民解放军军事医学科学院;2005年

6 邬开朗;RNA干扰在抑制病毒基因表达与复制中的作用研究[D];武汉大学;2005年

7 张敏;迟缓爱德华氏菌（Edwardsiella Tarda）LuxS/AI-2群体感应系统研究[D];中国科学院研究生院（海洋研究所）;2009年

8 陈齐;DUSP5等胚胎干细胞自我更新相关基因的RNA干扰研究[D];浙江大学;2010年

9 王峰;组氨酸激酶在马尔尼菲青霉菌中的功能研究[D];沈阳药科大学;2009年

10 袁长青;神经酰胺和凋亡诱导因子在UVA诱导细胞凋亡中的作用[D];第一军医大学;2005年

中国硕士学位论文全文数据库 前10条

1 夏定国;RNA干扰介导抑制家蚕核型多角体病毒（BmNPV）增殖的研究[D];中国农业科学院;2006年

2 涂宏钢;应用RNA干扰技术对新生隐球菌CNLAC1基因功能的初步研究[D];第二军医大学;2005年

3 孔雪;用RNA干扰技术研究人抗砷相关基因的功能[D];石河子大学;2007年

4 符少平;ZafA基因沉默对烟曲霉菌生长、毒力的影响[D];暨南大学;2009年

5 巢时斌;小片段发夹RNA的制备及其对Hela细胞端粒酶基因沉寂作用研究[D];中南大学;2003年

6 张会敏;辣椒CTOM1基因的克隆与基因沉默表达质粒的构建[D];广西大学;2004年

7 吴丹;MSTN基因RNAi双元素表达载体构建及效果研究[D];沈阳农业大学;2007年

8 高文龙;DOT1和组蛋白H3Lysine79甲基化在小鼠卵母细胞减数分裂中的作用[D];南京农业大学;2007年

9 马晓林;siRNA真核表达载体的构建及对MSTN基因表达抑制的研究[D];新疆农业大学;2008年

10 彭思扬;XAGE-1b腺病毒干扰载体的构建及其功能研究与一种fiber缺失型重组腺病毒系统的构建[D];复旦大学;2009年

，

本文编号：1177788