海马神经元原代培养与纯度鉴定方法的优化

发布时间：2017-11-13 11:23

  本文关键词：海马神经元原代培养与纯度鉴定方法的优化

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【摘要】：目的:通过优化和改进传统的神经元培养方法,探讨一个简单、高纯度的大鼠胚胎海马神经元的原代培养及活性检测方法。方法:颈椎脱臼处死孕鼠,迅速取海马,剥离血管网等结缔组织后,消化并吹打制成细胞悬液,以适当的密度接种入DMEM/HG培养基,4h后换用Neurobasal培养基,以后每2-3d进行1/3量换液。倒置显微镜观察神经元的形态变化,并采用CCK-8试剂盒检测神经元活性和神经元特异性烯醇化酶(NSE)鉴定神经元纯度。结果:细胞接种4h后贴壁,随着培养时间的延长神经元的形态发生一系列变化,从圆形、透亮、体积小逐渐变为椭圆形、三角形或椎形,有光晕,胞体增大,突起伸长且分支增多,在培养第4天后逐渐连接呈网络状。神经元纯度随时间的延长逐渐升高,培养第7天纯度高达90%以上。神经元在培养的第9、10天达到成熟,即可用于后续研究。结论:本实验方法简便易行,神经元纯度高、细胞活性好,体外存活时间长,是体外研究的良好实验模型,值得推广应用。
【作者单位】： 武汉大学人民医院;杭州市第七人民医院;
【基金】：十二五国家科技支撑计划项目(编号:2012BAI01B05)
【分类号】：R329
【正文快照】： 海马是哺乳动物大脑边缘系统的重要组成部分,主要参与学习、记忆、情绪反应等多种功能活动,与许多神经精神疾病的发生密切相关。因此,海马神经元是研究神经系统疾病、精神疾病的发病机制等的重要手段[1-3]。Banker等人在1977年首次成功的在体外分离并培养了海马神经元[4],此

【参考文献】

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本文编号：1180452