人源性EGFL6的重组表达及多克隆抗体制备研究

发布时间：2017-11-15 15:18

  本文关键词：人源性EGFL6的重组表达及多克隆抗体制备研究

  更多相关文章： 肿瘤细胞 EGFL 实时荧光定量RT-PCR 重组表达 多克隆抗体

【摘要】：目的研究发现人源性类表皮生长因子域EGFL6可促进组织血管新生并在肿瘤组织细胞中表达上调,预示其与肿瘤发生发展密切相关,本研究通过对EGFL6基因克隆,表达和纯化并制备其多克隆抗体,为深入研究EGFL6相关功能奠定基础。方法用实时荧光定量PCR方法检测肿瘤及正常组织细胞系中EGFL6基因表达水平,并扩增EGFL6基因片段,采用基因重组技术构建EGFL6原核表达载体,经诱导表达后利用镍离子柱亲和纯化EGFL6重组蛋白,免疫昆明小鼠制备抗EGFL6多克隆抗体,ELISA、Western blot方法检测抗体灵敏度和特异性。结果 RT-PCR检测发现EGFL6在肿瘤细胞系A375及SKOV3中高表达。成功构建表达载体pET32a(+)-EGFL6,实现可溶性EGFL6蛋白的诱导表达,纯化和抗体制备。SDS-PAGE和Western blot证实,重组EGFL6蛋白质与预期结果一致,抗血清能够特异地识别重组片段蛋白,重组全长蛋白及细胞系中天然EGFL6蛋白。结论 qRT-PCR检测得知EGFL6在肿瘤细胞系A375及SKOV3中表达量较高,并成功实现了EGFL6的重组表达,抗体制备及初步应用研究。
【作者单位】： 暨南大学生命科学技术学院
【基金】：中央高校基本科研业务费专项资金资助(21612112) 国家863项目(2009AA02Z112)
【分类号】：R392.11
【正文快照】： 类表皮生长因子(EGF)域家族蛋白在参与调控细胞周期,增殖和发育过程中起着非常重要的作用[1]。EGFL6作为一种新的类表皮生长因子(EGF)域超家族成员由Yeung等(1999年)首先发现,并证实其定位于人X染色体[2]。EGFL6由于其同时具有EGF结构域和MAM结构域,又被命名为MAEG[3]。新近

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前2条

1 晁耐霞;肖飞;蒋日婷;黄天明;赵飞兰;曾庆堂;李日伦;谢小薰;罗国容;;肝癌相关抗原Kinectin的多克隆抗体制备、鉴定及初步应用[J];免疫学杂志;2011年01期

2 王旭;逄越;王惠国;马彪;刘庆平;李文哲;;B细胞特异激活蛋白基因Pax5原核表达、纯化及多克隆抗体制备研究[J];免疫学杂志;2011年06期

【共引文献】

中国期刊全文数据库 前7条

1 刘丽娜;朱军民;丛延广;王长军;;2型猪链球菌溶血素及其抗血清的免疫保护活性研究[J];解放军医学杂志;2011年11期

2 刘丽娜;朱军民;丛延广;胡福泉;;2-型猪链球菌分泌性保护性抗原RfeA的确认[J];免疫学杂志;2011年08期

3 胡乐琴;柳俊秀;王权;何培民;;抗大田软海绵酸单克隆抗体的制备及免疫学特性分析[J];免疫学杂志;2011年09期

4 马彪;逄越;王旭;刘庆平;李文哲;;Pax5对B细胞分化发育调控作用的研究进展[J];免疫学杂志;2012年07期

5 焦鑫艳;马彪;王旭;刘庆平;李文哲;;Fut8基因通过促进VLA-4/VCAM-1表达影响B细胞发育[J];免疫学杂志;2012年08期

6 朴君;武翼;朴敬爱;李文哲;;血管内皮细胞黏附分子胞外区基因真核表达载体构建及表达[J];免疫学杂志;2013年02期

7 沈雁兵;马德宾;邹丽云;谢谆怡;万瑛;陈平;;肝细胞性肝癌相关miRNA的筛选和鉴定[J];免疫学杂志;2013年04期

【二级参考文献】

中国期刊全文数据库 前6条

1 黄天明;黄绍明;莫发荣;何少健;周素芳;邓琼英;李松峰;黄敏丽;李山;薛慧琴;梁皓;范容;闫磊;谢小薰;罗国容;;肝癌相关抗原kinectin基因片断的重组表达[J];广西医科大学学报;2006年03期

2 谢小薰,王延伟,黎鹏,蓝玲,赵飞兰,莫发荣,范容,罗国容;肝细胞癌相关抗原kinectin的血清学分析[J];科学技术与工程;2003年02期

3 王迎昕;郜恒骏;陈锡美;孟逊;;兔抗人PIWIL4蛋白多克隆抗体的制备和鉴定[J];免疫学杂志;2008年01期

4 史继静;刘朝奇;李斌;汪锦江;陈晶;;HIV-1蛋白酶基因的克隆、蛋白表达及抗体制备[J];免疫学杂志;2010年02期

5 王宇;田志革;欧阳凤菊;郭巍;相文华;王世泽;曲娟娟;;马乙型脑炎病毒E蛋白的原核表达及间接ELISA的初步应用[J];免疫学杂志;2010年07期

6 袁向亮;沈立松;;Pax5在早期B细胞定向分化发育中的作用[J];上海第二医科大学学报;2005年04期

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 陈晓华;蔡国平;;人致肺纤维化因子的重组表达和抗体制备[J];细胞与分子免疫学杂志;2007年10期

2 任艳敏;黄蓓;魏浩;赖柳静;;LKB1(Thr336)磷酸化多克隆抗体的制备及其应用[J];中国生物制品学杂志;2008年11期

3 刘刚;徐元基;姜云波;贾海泉;潘和平;杜芝燕;陆应麟;;人肿瘤转移相关基因mag-2的多克隆抗体的制备和鉴定[J];军事医学科学院院刊;2007年03期

4 杨秉芬,;李平;李娟;瞿秀华;李晓明;柳晓兰;孙启鸿;曹诚;;兔抗人热激蛋白70样蛋白1多克隆抗体的制备与初步鉴定[J];生物技术通讯;2009年05期

5 胡文森 ,吴明杰;~(99m)Tc单克隆抗体的放射免疫显象:临床研究[J];国际放射医学核医学杂志;1986年01期

6 张燕,薛耀明,郭爱林,张文敏;GST-IRS-4原核表达载体的构建、表达及抗GST-IRS4多克隆抗体的制备[J];实用医学杂志;2005年05期

7 吴镝,许国双,陈香美,师锁柱,洪权,张萍,吕扬;抗人有机阴离子转运蛋白4多克隆抗体的制备及其在肾脏的定位研究[J];中国中西医结合肾病杂志;2005年06期

8 徐永春,梁伟波,苟航,陈文婕,朱银华,贾静,张林;EB病毒GST-Rta融合蛋白的表达、纯化及其多克隆抗体的制备[J];四川大学学报(医学版);2005年05期

9 谢忠平,崔萍芳,宋霞,李华,龙润乡,洪超,熊秋霞,李文忠,李琦涵;利用HCV多表位复合抗原制备高效价抗体[J];中国生物制品学杂志;2005年04期

10 柯杭君,李清芬,李卓娅,姜小丹,冯玮,徐勇,熊平;抗人跨膜型肿瘤坏死因子-α多克隆抗体的制备和鉴定[J];华中科技大学学报(医学版);2005年04期

中国重要会议论文全文数据库 前10条

1 黄志刚;郜恒骏;陈锡美;胡莺;张小燕;孟逊;;兔抗人Argonaute3蛋白多克隆抗体制备、鉴定及组织芯片检测其在各种癌组织中的表达[A];中华医学会第七次全国消化病学术会议论文汇编（下册）[C];2007年

2 张敏;池霞;洪琴;童梅玲;郭锡熔;;人类肥胖相关新基因LYRM1多克隆抗体的制备及鉴定[A];中华医学会第十五次全国儿科学术大会论文汇编（上册）[C];2010年

3 杨敏;王锁英;许小朋;马洁;毛朝明;仝佳;邱谷风;胡正军;王胜军;邵启祥;许化溪;;人T-bet基因的表达、纯化及其多克隆抗体的制备[A];中国免疫学会第五届全国代表大会暨学术会议论文摘要[C];2006年

4 尤强;程琳玲;王颖;王树军;张惠珍;葛海良;周光炎;;CML66基因的克隆、原核表达及多克隆抗体的制备[A];中国免疫学会第四届学术大会会议议程及论文摘要集[C];2002年

5 陈波;钱，

本文编号：1190253