抗B型葡萄球菌肠毒素高亲和力单链抗体的制备

发布时间：2017-11-16 16:45

  本文关键词：抗B型葡萄球菌肠毒素高亲和力单链抗体的制备

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【摘要】：目的构建针对B型葡萄球菌肠毒素(SEB)的特异性单链抗体(scFv),并进行纯化和鉴定。方法设计抗SEB高亲和力单克隆抗体(mAb)FMU-SEB-No.2重链和轻链可变区基因片段VH和VL的引物,利用RT-PCR技术,从本室制备的抗SEBmAb FMU-SEB-No.2杂交瘤细胞株中扩增出VH和VL基因片段;然后通过在轻链引物上设计linker序列,重叠引物延伸法(SOE)将VH和VL基因拼接成scFv基因片段,并将其克隆入原核表达载体PGEX4T-1中;转化E.coli BL21(DE3)感受态细胞,IPTG诱导表达,融合蛋白经谷胱甘肽亲和层吸柱纯化。采用SDS-PAGE,Western blot,ELISA等方法对其表达水平和特异性进行分析。结果成功从1株抗SEB mAb FMU-SEB-No.2杂交瘤细胞株中扩增出VH和VL可变区基因,并通过linker序列将其拼接成scFv片段,大小约750 bp,编码250个氨基酸。PCR、酶切鉴定和测序结果表明表达载体构建成功。转化E.coli BL21(DE3),经IPTG诱导后,以可溶形式表达相对分子质量(Mr)约54 000的融合蛋白。经谷胱甘肽亲和层析法纯化融合蛋白,可获得纯度达90%以上的scFv,ELISA和Western blot法检测结果表明,可溶性scFv与抗原SEB有较强的结合活性。结论成功构建并表达出抗SEB的特异性单链抗体。
【作者单位】： 第四军医大学基础医学院免疫学系;
【基金】：新药创制科技重大专项(2008ZXJ09003-009,2012ZX09J12106-02B)
【分类号】：R392.11
【正文快照】： B型葡萄球菌肠毒素(staphylococal enterotoxinB,SEB)毒性大、极少量毒素侵入人或动物机体便会中毒,对人、动物及环境构成极大威胁[1]。1.7μg的SEB就可杀死一个成年人,是被列入联合国《禁止生物武器公约》核查清单的11种生物毒素之一。美军10年来的毒素战剂防治研究规划始终

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本文编号：1192945