金黄色葡萄球菌RsmA蛋白以及酿酒酵母ISW2染色体重塑复合物的结构初探

发布时间：2017-11-19 21:21

  本文关键词：金黄色葡萄球菌RsmA蛋白以及酿酒酵母ISW2染色体重塑复合物的结构初探

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【摘要】：1.金黄色葡萄球菌RsmA蛋白的初步晶体学研究金黄色葡萄球菌是一种重要的致病菌,是人类化脓感染中最常见的病原菌,能够引起局部化脓感染。抑制金黄色葡萄球菌感染的一种方式是抑制其相关毒性蛋白及毒性分子的表达。RsmA蛋白是金黄色葡萄球菌中的一种16S rRNA小亚基甲基转移酶,负责将16S rRNA 3’端第一个发卡结构区两个连续的腺嘌呤进行甲基化,并且能够使每个腺嘌呤第6位的氮原子发生一个双甲基化反应。研究发现RsmA蛋白的缺失会影响30S小亚基的生物合成,进而影响到蛋白质的相关翻译过程。对于该部分研究试图通过结构生物学的方法探究RsmA蛋白催化腺嘌呤发生双甲基化的结构基础,通过结构分析找到RsmA上潜在的靶向小分子药物位点,通过设计药物来抑制金黄色葡萄球菌感染。于是我们进行了RsmA蛋白的克隆、表达、纯化并对Native和SeMet-RsmA蛋白进行了晶体生长,收到了一套3.2 A的数据,通过数据处理了解了RsmA蛋白的一些初步晶体学数据,通过ITC实验检测了RsmA对SAM和SAH的结合,并进行了RsmA与SAM和SAH的共结晶,通过晶体筛选获得了复合物的晶体,但质量并不高有待进一步优化。2.酿酒酵母中的ISW2染色体重塑复合物的结构探索真核生物体内,染色质以核小体的形式存在,这种包装结构非常紧密,使得转录调控蛋白不能结合到DNA上,影响基因的表达。ATP依赖的染色体重塑复合物可以利用ATP水解释放的能量对核小体进行移动,组装,替换,进而导致细胞中染色质的结构发生改变,对基因的表达情况起到调控作用。在酿酒酵母中存在一种保守的ATP依赖的染色体重塑复合物ISWI家族,包含有ISWl和ISW2两种主要的重塑复合物。其中ISW2染色体重塑复合物含有iSW2、Itc1、Dpb4和Dlsl四个组分,该复合物可以调控核小体串联的间隔,发挥重塑功能。相比于ISWl,ISW2蛋白在发生重塑过程中对于核小体间的链接DNA的长度是没有要求的,并且对于核小体的结构不会起到破坏作用。对于这部分工作,尝试通过解析该复合物及其各组分的结构来探究其重塑的机理。我们对于ISW2各个组分进行了克隆、表达、纯化并进行了晶体生长,获得了Isw2单体的晶体。通过EMSA实验和pull-down实验探究了Isw2和Dpb4+Dls1对于双链DNA的结合能力以及Isw2与Dpb4+Dls1相互作用的片段,尝试了Isw2、Dpb4+Dls1+dsD NA和Isw2片段-Dpb4+Dls1的共晶。与此同时对得到的晶体进行了优化以及衍射数据的收集,希望得到结构信息。
【学位授予单位】：中国科学技术大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R378;Q93

【共引文献】

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1 曾瑜;ARID1A在人脑胶质瘤中的表达及对其生物学行为影响[D];中南大学;2013年

2 李晶;PI3K/AKT和MEK/ERK通路调控H3K27me3甲基化酶和去甲基化酶基因表达的研究[D];石河子大学;2013年

3 邹保红;染色质修饰基因HUB1和CHR5及转录因子MYB44在拟南芥防卫反应中的功能研究[D];南京农业大学;2013年

4 陈德伟;Brg1和Brm对CAMs和ET-1的转录调控及其在低氧性肺动脉高压中的作用和机制研究[D];第三军医大学;2014年

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1 陈吉刚;内质网应激上调SET7/9表达机制及其在糖尿病肾病中的作用[D];第三军医大学;2013年

2 钟晓超;水稻组蛋白末端修饰酶OsSRT1和JMJ706的功能研究[D];华中农业大学;2013年

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本文编号：1204962