利用体外甲状腺滤泡模型研究甲状腺转录因子在调控甲状腺功能中的作用

发布时间：2017-11-20 00:15

  本文关键词：利用体外甲状腺滤泡模型研究甲状腺转录因子在调控甲状腺功能中的作用

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【摘要】：目的体外构建二腔室甲状腺滤泡模型,通过慢病毒载体过表达甲状腺转录因子(TTF-1、PAX-8)后检测模型二腔室中甲状腺激素的合成变化,以探讨甲状腺转录因子在调控甲状腺功能中的作用。方法1.取对数生长期的人甲状腺上皮细胞株,将其培养于Transwell培养板(Corningò3450)内用于构建二腔室模型,待细胞完全融合隔离了上下腔后,便形成了二腔室模型。以此模型为研究对象,以培养于6孔板的单层细胞作为对照,在基础培养基添加合适浓度碘、1m IU/L TSH,继续培养36小时,采用直接化学发光法检测培养液中的FT3、FT4、Tg,采用砷铈催化分光光度测定方法检测碘浓度。2.根据Gen Bank的基因序列设计引物,采用PCR克隆TTF-1、PAX-8序列全长,经Eco RI和Bam HI双酶切的片段与p LVX-puro连接后转化E.coli感受态细胞,在含有氨苄青霉素的LB平板上筛选阳性转化子进行测序鉴定。重组慢病毒载体构建完成后,应用PEI共转染293T细胞获得重组慢病毒,获得的病毒上清经滴度测定后可转染二腔室模型。3.用空载慢病毒转染的二腔室模型作为对照组,以过表达(TTF1、PAX-8)慢病毒转染的二腔室模型作为实验组,采用直接化学发光法检测培养液中的FT3、FT4、Tg,采用砷铈催化分光光度测定方法检测碘的浓度。结果1.二腔室模型FT3、FT4合成及摄碘量比单层细胞组显著增加;2.过表达TTF-1及PAX-8,FT3、FT4的合成增多、摄碘量增多;3.过表达TTF-1时FT3、FT4合成量显著多于过表达PAX-8,但碘的摄取量两者没有明显区别。结论1.二腔室模型能够模拟甲状腺滤泡结构,具备合成甲状腺激素及摄碘功能。2.利用二腔室模型,证实了甲状腺滤泡腔内存在FT3、FT4。3.TTF-1或PAX-8过表达上调甲状腺激素合成,且TTF-1的作用显著大于PAX-8。
【学位授予单位】：福建医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R3416

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本文编号：1205401