肠道病毒71型的全长cDNA感染性克隆的构建与鉴定

发布时间：2017-11-22 19:20

  本文关键词：肠道病毒71型的全长cDNA感染性克隆的构建与鉴定

  更多相关文章： 肠道病毒型 感染性克隆 一步生长曲线

【摘要】：目的构建一株肠道病毒71型的全长cDNA克隆并验证感染性。方法用长片段高保真RT-PCR方法扩增肠道病毒71型87-2008 Xi'an株的cDNA,装入pBR322载体。将该克隆线性化,体外转录后转染RD细胞后,通过观察CPE及RT-PCR验证其感染性。随后利用空斑法测定拯救病毒的一步生长曲线。结果成功构建了肠道病毒71型87-2008 Xi'an株的全长cDNA克隆;体外转录及转染RD细胞60 h后可观察到明显的CPE现象;RT-PCR在转染RD细胞中检测到病毒的存在;成功利用空斑法测定了拯救病毒的一步生长曲线,最大滴度达到2×107pfu/mL。结论成功构建了肠道病毒71型87-2008 Xi'an株的全长cDNA克隆并验证了其感染性,同时测定了拯救病毒的一步生长曲线,与野生型病毒相近。
【作者单位】： 中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院医学分子生物学国家重点实验室;
【基金】：国家自然科学基金(31071203)
【分类号】：R373
【正文快照】： 近年来手足口病(hand,foot and mouth disease,HFMD)感染在世界各地屡有报道[1-4],在2008年中国大陆有488 955人感染手足口病并导致其中126人死亡,而死亡病例中的绝大多数为肠道病毒71型(enterovirus 71,EV71)感染所导致[5]。由此可见手足口病的流行已给我国婴幼儿群体的健康

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 黄耀伟,李龙,于涟;人类及动物RNA病毒的反向遗传系统[J];生物工程学报;2004年03期

2 吴波平;冯力;时洪艳;陈建飞;孙东波;高秀春;白兴华;;猪捷申病毒Swine/CH/IMH/03全长cDNA克隆的构建[J];中国预防兽医学报;2007年12期

3 温峰琴;樊树芳;胡永浩;邓国华;陈化兰;;H5N1亚型高致病性禽流感病毒A/Duck/Guangxi/53/02株感染性克隆的构建[J];中国兽医学报;2008年05期

4 钱淑凤;郝玉兰;郑翠玲;;RNA病毒感染性分子克隆的研究[J];中国畜牧兽医;2008年09期

5 徐绍建;李俊;曹帅;时建立;周顺;徐文;张秀美;王金宝;;猪圆环病毒2型全序列分析及感染性克隆的构建[J];中国兽医杂志;2009年01期

6 揣侠;谭文杰;;以BAC为基础的水痘-带状疱疹病毒的感染性克隆技术及其应用[J];中国生物工程杂志;2010年05期

7 杨秀惠;严延生;;肠道病毒71型(EV71)感染性克隆的构建[J];海峡科学;2010年10期

8 井波;李呈军;陈化兰;;一株H9N2禽流感病毒HA、NA感染性克隆的构建[J];黑龙江畜牧兽医;2010年21期

9 郑海学;刘湘涛;尚佑军;吴锦艳;白兴文;靳野;孙世琪;冯霞;田宏;郭慧琛;郭建宏;刘在新;常惠芸;马军武;谢庆阁;;猪水泡病病毒HK/70株全长cDNA分子克隆感染性的鉴定[J];科学通报;2006年16期

10 刘新文;姚清侠;曹胜波;郭东春;陈焕春;;嵌合猪圆环病毒PCV2-1感染性克隆的构建[J];中国兽医学报;2007年01期

中国重要会议论文全文数据库 前10条

1 孔义波;张兴晓;姜世金;赵钦;孙亚妮;;内源性禽白血病病毒SD0501株感染性克隆的构建及鉴定[A];山东畜牧兽医学会禽病学专业委员会第一次学术研讨会论文集[C];2009年

2 潘梦;杨小蓉;郭鑫;张大丙;杨汉春;;3型鸭甲肝病毒C-GY株全长感染性克隆的构建和病毒拯救的鉴定[A];中国畜牧兽医学会禽病学分会第十五次学术研讨会论文集[C];2010年

3 张纪元;崔治中;丁家波;姜世金;;J亚群白血病病毒NXO101株感染性克隆化病毒的构建及其致病性[A];中国畜牧兽医学会禽病学分会鸡淋巴白血病防控技术研讨会论文集[C];2010年

4 刘长明;危艳武;陆月华;张朝霞;袁婧;黄立平;;猪圆环病毒1型感染性克隆的构建与病毒拯救[A];中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第七次研讨会论文集[C];2008年

5 吴波平;冯力;时洪艳;陈建飞;孙东波;高秀春;白兴华;;猪捷申病毒Swine/CH/IMH/03全长cDNA克隆的构建[A];中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第七次研讨会论文集[C];2008年

6 朱于敏;于晓明;黄耀伟;黄芬芬;于瑞嵩;董世娟;李震;;猪戊型肝炎病毒(HEV)分离株SAAS-FX17全长感染性克隆的构建[A];中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会第三次学术研讨会论文集[C];2012年

7 李薇;余兴龙;罗维;白霞;李润成;黎满香;葛猛;王亚;向卫军;李晶;;三种亚群PCV-2感染性克隆的构建及体内外感染性试验[A];中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第七届全国会员代表大会暨第十三次学术研讨会论文集（上册）[C];2009年

8 李俊;于周;徐绍建;程凯慧;王金宝;;猪圆环病毒2型感染性DNA的构建及体外拯救[A];中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第七届全国会员代表大会暨第十三次学术研讨会论文集（上册）[C];2009年

9 黄耀伟;李龙;于涟;;人类及动物RNA病毒反向遗传系统[A];人畜共患传染病防治研究新成果汇编[C];2004年

10 龚黎明;葛琼;严菊英;卢亦愚;冯燕;茅海燕;李敏红;周敏;;浙江省肠道病毒71型的分离与VP1区域序列分析[A];应对突发公共卫生事件论坛论文集[C];2005年

中国博士学位论文全文数据库 前10条

1 黄勤锋;猪繁殖与呼吸综合征病毒的感染性克隆及其复制子载体的研究[D];华中农业大学;2009年

2 汤德元;乙脑病毒的分离鉴定和全长基因克隆的研究[D];四川农业大学;2004年

3 王晓艳;鸡贫血病毒结构蛋白抗原表位研究及感染性克隆构建[D];中国农业科学院;2007年

4 于敏;猪戊型肝炎病毒全基因组序列分析及感染性克隆的构建[D];东北农业大学;2007年

5 黄海龙;福建省HIV-1CRF01_AE流行株的表型分析、基因序列特征、膜蛋白表达及感染性克隆构建的研究[D];福建医科大学;2007年

6 张辉;伪狂犬病毒间质蛋白UL14功能研究及TK～-/gG～-株感染性克隆构建[D];华中农业大学;2007年

7 韦祖樟;嵌合动脉炎病毒全长cDNA克隆的构建及应用[D];中国农业科学院;2008年

8 帅江冰;猪圆环病毒衣壳蛋白核定位信号对其复制的影响及突变体病毒的免疫原性研究[D];浙江大学;2008年

9 张羽;日本脑炎病毒NJ2008株人工突变致弱及其N-糖基化位点的功能研究[D];南京农业大学;2011年

10 孟春春;ClassⅠ新城疫弱毒的毒力演化及自噬在新城疫病毒感染肿瘤细胞中的作用[D];中国农业科学院;2012年

中国硕士学位论文全文数据库 前10条

1 杨顺利;圆环病毒Ⅱ型感染性克隆的构建及多串连表位ELISA检测方法的建立[D];中国农业科学院;2010年

2 吴星星;猪圆环病毒2型新疆株的分离鉴定及感染性克隆的构建[D];新疆农业大学;2012年

3 郗鑫;猪2型圆环病毒感染性分子克隆构建及其ORF1基因的表达[D];华中农业大学;2004年

4 武专昌;一株B亚型ALV的分离、前病毒全基因组序列分析和感染性克隆的构建[D];山东农业大学;2012年

5 刘新文;猪Ⅱ型圆环病毒分离鉴定及嵌合病毒PCV2-1感染性克隆构建的研究[D];华中农业大学;2005年

6 温峰琴;高致病性禽流感病毒A/Duck/Guangxi/53/02株感染性克隆构建及分子演化研究[D];甘肃农业大学;2006年

7 郭t，

本文编号：1215785