梅毒包膜脂蛋白基因的克

发布时间：2017-11-28 16:09

  本文关键词：梅毒包膜脂蛋白基因的克隆、表达及临床抗体的检测

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【摘要】：目的:克隆tp15、tp17、tp47、tp0453基因,构建原核表达质粒,进行蛋白的表达、纯化并用于检测梅毒病人血清抗体。方法:PCR扩增4个基因,构建原核表达质粒pET28a(+)/tp15、pET28a(+)/tp17、pGEX-6P-1/tp47和pGEX-6P-1/tp0453,经双酶切及测序鉴定,将获得的阳性克隆转化到大肠杆菌BL21(DE3)中进行诱导表达,对表达产物进行SDS-PAGE电泳及Western blot分析鉴定,利用亲和层析方法对4个蛋白进行纯化。将四个纯化的蛋白固定到NC膜上,利用immuno-slot blot方法对梅毒病人血清进行检测。结果:经鉴定表明成功构建四个原核表达质粒。SDS-PAGE电泳及Western blot分析结果显示四个重组蛋白大小正确。immuno-slot blot实验显示四个蛋白能与梅毒病人血清特异性结合。结论:成功克隆、表达和纯化了tp15、tp17、tp47、tp0453蛋白,四个蛋白可以与梅毒病人血清特异性结合,为进一步建立梅毒病人血清检测试剂盒奠定基础。
【作者单位】： 三峡大学分子生物学研究所;
【分类号】：R392.1
【正文快照】： 0引言梅毒是由梅毒螺旋体感染人体而发生的常见性传播疾病,可累及全身各个器官且临床表现千变万化,侵袭力极强,已经成为继艾滋病后最为严重的性传播疾病,严重危害到人类的身体健康[1]。随着分子生物学的发展,我们发现梅毒螺旋体的外膜脂蛋白作为重要的刺激机体产生免疫应答的

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本文编号：1234539