稳定过表达人SIRT1基因的HEK293细胞系的建立
本文关键词：稳定过表达人SIRT1基因的HEK293细胞系的建立
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【摘要】：目的:构建人沉默信息调节因子2同源蛋白1(SIRT1)基因的真核表达载体,建立稳定过表达人SIRT1的HEK293细胞系。方法:将含有SIRT1的克隆载体pCR Ⅱ-TOPO-SIRT1双酶切后,连接至真核表达载体pcDNA3.1(+)中,连接产物经酶切鉴定后进行测序。构建的重组真核表达质粒pcDNA3.1(+)-SIRT1转染HEK293细胞,G418进行筛选,Real-time PCR和Western Blot分别从mRNA和蛋白水平检测SIRT1的表达。结果:酶切分析和测序结果证实,SIRT1基因成功插入真核表达质粒pcDNA3.1(+)中。Real-time PCR和Western Blot结果显示稳定转染pc DNA3.1(+)-SIRT1的HEK293细胞SIRT1的表达水平明显高于未转染细胞(P㩳0.01)。结论:成功构建了真核表达载体pcDNA3.1(+)-SIRT1,并建立了稳定过表达SIRT1基因的HEK293细胞系,为进一步研究SIRT1基因在心血管疾病中的作用及其机制奠定了基础。
【作者单位】： 西安交通大学医学院药理系;
【基金】：国家自然科学基金资助项目(编号:81072643)
【分类号】：R363
【正文快照】： 沉默信息调节因子2同源蛋白1(silent matingtype information regulation2homologue1,SIRT1)是一种NAD+依赖的组蛋白/非组蛋白去乙酰化酶[1]。SIRT1在不同的组织中广泛表达,介导的细胞生理功能包括转录沉默、能量代谢和衰老等[2-4]。研究已证实SIRT1在动脉粥样硬化、心肌炎损
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