E8.5-E12.5大鼠胚胎整体原位杂交技术

发布时间：2017-12-01 14:31

  本文关键词：E8.5-E12.5大鼠胚胎整体原位杂交技术

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【摘要】：目的:通过优化实验条件,建立大鼠胚胎整体原位杂交方法。方法:E8.5-E10.5大鼠胚胎4%多聚甲醛固定6 h,不经蛋白酶K消化;E11.5-E12.5胚胎4%多聚甲醛固定过夜,蛋白酶K系列稀释实验确定消化浓度和时间。E8.5-E12.5胚胎预杂交2 h,地高辛标记的甘油二酯激酶ζ(DGKζ)寡核苷酸探针杂交24 h,山羊血清封闭2.5～3 h,地高辛抗体4℃过夜,冷TBST和NTMT漂洗1～2 h,NBT/BCIP避光显色。应用免疫组织化学方法观察DGKζ在E12.5大鼠胚胎组织的表达。结果:DGKζ在不同胚龄大鼠胚胎均有清晰的杂交信号,主要集中在神经系统;E12.5大鼠胚胎脑泡、背根神经节有较强表达,与免疫组化结果一致。结论:本研究建立了简便、可行、重复性高的E8.5-E12.5大鼠胚胎整体原位杂交方法。
【作者单位】： 山西医科大学组织胚胎学教研室;山西焦煤西山煤电集团公司职工总医院神经内科;
【基金】：山西省自然科学基金(2008011079-2) 山西医科大学科技创新基金(01200719)
【分类号】：R321
【正文快照】： 胚胎发生是一个复杂的生物过程,多种基因共同参与调节。脊椎动物的胚胎整体原位杂交技术始于二十世纪九十年代,可以直观显示基因在胚胎发育过程中的时空表达,是一种能精确反映基因表达三维信息的技术手段[1]。胚胎整体原位杂交实验繁杂、过程较长,有多个重要步骤影响最终实验

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前2条

1 吴燕,马子敏,刘淑红,范文红,范明;小鼠胚胎整体原位杂交实用技术的建立[J];解剖学报;2004年04期

2 肖翠英,Ditsa Levanon,张思仲,Yoram Groner;一种进行基因表达研究的有效技术——小鼠全胚胎RNA原位杂交[J];中华医学遗传学杂志;2004年01期

【共引文献】

中国期刊全文数据库 前4条

1 樊z岩，

本文编号：1241448