β-hCG蛋白在大肠杆菌系统的表达、纯化及活性鉴定

发布时间：2017-12-04 19:16

  本文关键词：β-hCG蛋白在大肠杆菌系统的表达、纯化及活性鉴定

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【摘要】：目的获得β-人绒毛膜促性腺激素(β-hCG)融合蛋白β-hCG/GST并验证其抗原活性。方法利用PCR法扩增β-hCG全长基因,将其克隆至原核表达载体pET-42a中,构建重组质粒pET-42a-β-hCG,将该重组质粒转化至大肠杆菌BL21(DE3)中IPTG诱导表达,经SDS-PAGE分析,亲和层析法纯化融合蛋白,目的蛋白用Western blot法鉴定,ELISA检测纯化得到的融合蛋白的抗原活性。结果测序结果证实成功扩增出目的基因β-hCG;酶切和测序结果证实pET-42a-β-hCG原核表达载体构建成功;转化后可以成功诱导并纯化出大小与预期一致的蛋白;Western blot法及ELISA检测证实纯化后的β-hCG/GST融合蛋白具有良好的免疫原性。结论成功获得β-hCG/GST融合蛋白,该蛋白具有良好的免疫原性,为以β-hCG为靶位的抗肿瘤主动免疫治疗研究奠定了基础。
【作者单位】： 解放军总医院泌尿外科;军事医学科学院基础医学研究所;
【基金】：国家自然科学基金(30840094) 国家高技术研究发展计划(863)项目(2007AA02Z451)
【分类号】：R392.12
【正文快照】： 人绒毛膜促性腺激素(human chorionic gonadotro-pin,hCG)是由胎盘合体滋养层细胞合成和分泌的一种糖蛋白激素,通常可以在妇女妊娠期间检测到,在早期妊娠中起促进胚泡发育、维持妊娠的作用。hCG是一种由α链和β链两个亚基非共价键结合组成的异二聚体分子[1],其α亚基与促甲

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本文编号：1252060