猪带绦虫TSO45W-4B基因的克

发布时间：2017-12-05 16:41

  本文关键词：猪带绦虫TSO45W-4B基因的克隆、表达和抗体制备

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【摘要】：目的克隆、表达猪带绦虫TSO45W-4B基因,以重组蛋白TSO45W-4B免疫兔制备抗体。方法全基因合成猪带绦虫TSO45W-4B抗原编码基因,定向克隆至pGEX-1λT表达载体,构建重组质粒pGEX-TSO45W-4B。转化至大肠埃希菌ArcticExpress(DE3)后,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析表达情况。表达产物经谷胱甘肽-S-转移酶(GST)亲和层析柱纯化后,免疫新西兰大白兔,制备抗血清。GST亲和层析柱纯化获得血清中抗体后,ELISA测定抗体效价,蛋白质印迹法(Western blotting)鉴定抗体特异性。结果酶切和测序结果表明,重组质粒pGEX-TSO45W-4B构建成功。SDS-PAGE结果显示,重组蛋白相对分子质量(M r)约为40 000,经GST亲和层析后可获得纯度为90%以上的重组蛋白。ELISA结果显示,抗体的效价为1∶512 000。Western blotting分析结果显示,该抗体能与纯化的重组蛋白发生特异性反应,在约M r40 000处出现一条带,与预期大小一致。结论猪带绦虫TSO45W-4B基因能在大肠埃希菌中表达,制备了TSO45W-4B重组蛋白和兔抗血清。
【作者单位】： 遵义医学院寄生虫学教研室;遵义医学院附属第一医院中医科;
【基金】：国家自然科学基金(No.81160206) 贵州省教育厅资助项目(黔教2010040号)~~
【分类号】：R383.3
【正文快照】： 猪囊尾蚴病(cysticercosis cellulosae)又称囊虫病(cysticercosis),是由猪带绦虫(Taenia solium)的中绦期幼虫寄生在人体皮下、肌肉、脑和眼等器官引起的一种严重危害人类健康的人兽共患寄生虫病,已成为全球性的公共卫生问题。中国是囊尾蚴病高发国家之一,其中以东北、华北、

【参考文献】

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本文编号：1255504