IRE1α重组腺病毒载体对ATDC5软骨干细胞增殖及凋亡的影响

发布时间：2017-12-06 04:19

  本文关键词：IRE1α重组腺病毒载体对ATDC5软骨干细胞增殖及凋亡的影响

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【摘要】：目的构建重组人IRE1α腺病毒,观察其对软骨干细胞ATDC5增殖与凋亡的影响。方法应用pAdEasyTM腺病毒载体系统构建包含全长IRE1α基因和RNase+Kinase核心结构域的重组穿梭质粒pAdTrack-IRE1α、pAdTrack-R+K,通过电转法分别与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1进行同源重组,获得重组腺病毒pAd-IRE1α、pAd-R+K。随后在HEK-293细胞中包装并扩增重组腺病毒颗粒Ad-IRE1α、Ad-R+K。用直接PCR法鉴定重组腺病毒,后者体外感染软骨干细胞ATDC5,荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白(GFP)感染效率,并应用流式细胞仪分别检测在内质网应激(ERS)和非ERS状态时重组腺病毒对ATDC5细胞增殖和凋亡的影响。结果酶切鉴定和PCR证实成功构建了重组腺病毒质粒pAd-IRE1α、pAd-R+K。流式细胞仪检测结果显示,在ERS状态时,重组腺病毒质粒Ad-IRE1α、Ad-R+K感染后ATDC5细胞G1期比例明显降低,S期细胞比例明显升高(P0.05),细胞凋亡率明显增高(P0.05)。结论含IRE1α基因的重组腺病毒感染可促进ATDC5细胞的增殖和凋亡。
【作者单位】： 重庆医科大学细胞生物学及遗传学教研室;重庆市璧山县人民医院输血科;
【基金】：国家自然科学基金(81171697) 教育部新世纪优秀人才支持计划(NCET-12-1090) 重庆市高等学校优秀人才支持计划(2011-65)~~
【分类号】：R346
【正文快照】： IRE1α(typeⅠtransmembrane protein kinase/endoribonuclease)是内质网上的一种跨膜蛋白,为具有激酶(kinase)和核糖核酸内切酶(RNase)活性的双功能酶。细胞处于内质网应激(endoplasmicreticulum stress,ERS)时,可诱导IRE1α的内质网腔侧结构域发生二聚化,激活胞质的蛋白激

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