抗SEB单克隆抗体可变区基因克隆及单链抗体的基因构建和表达

发布时间：2017-12-07 23:18

  本文关键词：抗SEB单克隆抗体可变区基因克隆及单链抗体的基因构建和表达

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【摘要】：目的从分泌抗SEB的单克隆抗体(FMU-SEB-No.1)杂交瘤细胞中,克隆出FMU-SEB-No.1重链和轻链可变区(VH和VL)基因,构建FMU-SEB-No.1单链抗体(scFv)的原核表达载体,并进行scFv基因的蛋白表达。方法从FMU-SEB-No.1杂交瘤细胞中提取总RNA,采用RT-PCR扩增出VH和VL基因;通过在引物上设计linker序列,拼接VH和VL为完整FMU-SEB-No.1的scFv基因(FMU-SEB-scFv)。将测序正确的scFv基因克隆入PGEX4T-1载体,转化入E.coli BL21(DE3)进行蛋白表达。通过SDS-PAGE,Western blot法分析其表达水平和特异性,酶联免疫吸附试验(ELISA)鉴定其抗原结合活性。结果测序结果显示,本实验成功克隆出FMU-SEB-No.1重链及轻链可变区基因,并成功构建FMU-SEB-scFv基因,所得的基因全长为750 bp,编码250个氨基酸。SDS-PAGE和Western blot分析表明,PGEX4T1-FMU-SEB-scFv在E.coli BL21(DE3)可表达为Mr约54 000的可溶型scFv/GST融合蛋白。间接ELISA检测结果表明,可溶型scFv/GST融合蛋白与SEB具有较高的抗原结合活性。结论制备并鉴定了针对SEB的基因工程抗体,为开发出针对SEB的治疗性抗体奠定了实验基础。
【作者单位】： 第四军医大学基础医学院免疫学系;
【基金】：重大新药创制科技重大专项(2008ZXJ09003-009,2012ZX09J12106-02B)
【分类号】：R392.1
【正文快照】： 葡萄球菌肠毒素(staphylococcal enterotoxins,SE)是金黄色葡萄球菌(S.aureus,SA)分泌的一种具有超抗原活性的细菌外毒素[1]。葡萄球菌超抗原毒素在刺激机体免疫反应时,不需要抗原呈递细胞的摄取并加工成抗原多肽后再呈递给T淋巴细胞,而是直接与抗原提呈细胞上的MHCⅡ分子和T

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前1条

1 陈任安;田江红;汪桦;;人源性抗NS5B单链抗体的制备及鉴定[J];细胞与分子免疫学杂志;2012年06期

【共引文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 陈兰英,赵桢,王晓涛,屈二军,陈建南;HSP70基因在人胃癌、食道癌及宫颈癌中高表达和癌变关系的研究[J];癌变.畸变.突变;2005年04期

2 程烽;盛燕;施静艺;陈漪;徐潮;刘智;梁军;潘春明;朱忠勇;宋怀东;;重叠延伸PCR法构建UGRP1基因启动子的点突变表达载体[J];癌变.畸变.突变;2007年01期

3 温居一;张积仁;李鹏;张军;王斌;;NADH对二乙基亚硝胺所致L02人肝细胞株p53基因突变和c-erbB2基因表达的影响[J];癌变.畸变.突变;2009年05期

4 金艺凤;李铁臣;王莹;刘东华;孙珍贵;;ERCC1和XPD单核苷酸多态性与非小细胞肺癌铂类化疗敏感性的关系[J];癌变·畸变·突变;2010年05期

5 王继英;武英;郭建凤;呼红梅;张印;;莱芜黑猪保种群促卵泡素β亚基和雌激素受体基因、基因型变化情况[J];山东农业科学;2007年01期

6 陈静;胡晓辉;苗华荣;张建成;禹山林;;花生SRAP-PCR技术体系的优化[J];山东农业科学;2008年05期

7 陈长宝;朱树华;周杰;;改良CTAB法提取成熟肥城桃果实的总RNA[J];山东农业科学;2009年05期

8 葛宏华,肖亚中,姚建平;人心室肌球蛋白轻链1基因的克隆及其体外的表达与纯化[J];安徽大学学报(自然科学版);2004年06期

9 侯新东;盛桂莲;张桦;腊萍;;质粒DNA提取方法的探讨[J];安徽农学通报;2006年13期

10 朱美霞,孟艳玲,陈良兵;大豆与棉花抗性基因类似物的同源性比较及其进化分析[J];安徽农业科学;2005年02期

中国重要会议论文全文数据库 前10条

1 朱林;江昌俊;叶爱华;李叶云;余梅;邓威威;;茶树ATP硫化酶和硒半胱氨酸甲基转移酶基因植物表达载体的构建[A];现代农业理论与实践——安徽现代农业博士科技论坛论文集[C];2007年

2 徐波;张莉;李启云;王景会;姜媛媛;杨贞耐;;牛凝乳酶成熟肽基因在大肠杆菌中的表达[A];中国奶业协会年会论文集2008（下册）[C];2008年

3 刘冬光;廖娟红;于清龙;陈颖钰;陈焕春;郭爱珍;;融合蛋白Rv3872/CFP-10/ESAT-6的制备及在牛结核诊断中的初步应用[A];中国奶业协会年会论文集2009（上册）[C];2009年

4 张海龙;田兆丰;董志;张晏如;张飞云;;多花黑麦草斑驳病毒外壳蛋白基因在大肠杆菌中的表达[A];2010植物免疫机制研究及其调控研讨会论文集[C];2010年

5 闫云君;蔡勇;杨江科;;基于易错POR技术的短小芽胞杆菌(Bacillus pumilus)脂肪酶YZO2的定向进化[A];节能环保 和谐发展——2007中国科协年会论文集（一）[C];2007年

6 李玫;廖宝文;;红树林湿地烷烃降解菌的分离筛选[A];第十三届中国科协年会第16分会场-沿海生态建设与城乡人居环境学术研讨会论文集[C];2011年

7 郭奕斌;陈路明;孟亚仙;王晶晶;杜传书;潘敬新;;一个广东四川家庭的IDS基因新突变[A];第六届全国优生科学大会论文汇编[C];2006年

8 于占东;赵双宜;何启伟;王翠花;牟晋华;刘春香;;抗芜菁花叶病毒转基因大白菜的研究[A];中国园艺学会第十届会员代表大会暨学术讨论会论文集[C];2005年

9 龚束芳;杨涛;车代弟;;偃麦草根茎非质体蛋白质修饰冰晶能力的观察[A];2007年中国园艺学会观赏园艺专业委员会年会论文集[C];2007年

10 王英;滕齐辉;曹慧;胡锋;崔中利;;淹水和旱作水稻土中细菌群落多样性的空间分布[A];第四次全国土壤生物和生物化学学术研讨会论文集[C];2007年

中国博士学位论文全文数据库 前10条

1 徐荣燕;嗜热真菌糖苷酶的基因克隆、表达与分子改造[D];山东农业大学;2010年

2 殷慧群;猪诱导性多潜能干细胞的建立[D];安徽农业大学;2010年

3 杨瑞梅;单链抗体介导狂犬病毒shRNA靶向制剂的研究[D];甘肃农业大学;2010年

4 宋翠平;H5N1禽流感和鹅Ⅰ型副粘病毒分离株的生物学特性及感染性的研究[D];中国海洋大学;2010年

5 郭新军;拟黑多刺蚁肌细胞增强因子2与肌钙蛋白Ⅰ亚基基因的克隆及其在发育中的表达研究[D];陕西师范大学;2010年

6 生书晶;何首乌芪合酶基因（FmSTS）的克隆、鉴定及转化拟南芥研究[D];华南理工大学;2010年

7 梁东;苹果山梨醇代谢相关基因的分子特性研究[D];西北农林科技大学;2010年

8 朱彦涛;甘蓝型油菜Polima CMS和陕2A CMS的形态和生化特征及其胞质遗传物质的比较研究[D];西北农林科技大学;2010年

9 温武军;鲤抗菌肽基因的克隆及其功能研究[D];山东师范大学;2011年

10 王秀娟;嗜热真菌纤维二糖水解酶（CBHⅠ、CBHⅡ）和内切葡聚糖酶（EGⅠ）的分子改造[D];山东农业大学;2011年

中国硕士学位论文全文数据库 前10条

1 高红梅;ETEC对断奶腹泻仔猪胃肠道紧密连接蛋白ZO-1的影响[D];华中农业大学;2010年

2 王树云;斑点叉尾洶病毒ORF6和ORF10基因的原核表达及其功能的初步研究[D];华中农业大学;2010年

3 汪艳杰;水稻polycomb基因家族甲基化状态初步检测[D];华中农业大学;2010年

4 王伟;恶臭假单胞菌表面展示细菌漆酶及对染料的脱色性能[D];华中农业大学;2010年

5 黄辉;哈维弧菌表面抗原的克隆和真核表达[D];华中农业大学;2010年

6 段龙川;产毒素多杀性巴氏杆菌重组沙门氏菌基因工程疫苗的研究[D];华中农业大学;2010年

7 龚瑞;粘附素ClfA和Cna对金黄色葡萄球菌乳腺炎的免疫保护研究[D];华中农业大学;2010年

8 刘源;猪胸膜肺炎放线杆菌双组分调控系统ΔnarQ/narP突变株构建及功能研究[D];华中农业大学;2010年

9 李善文;蟾蜍灵对大鼠肾小球系膜细胞增殖及凋亡的影响[D];南京医科大学;2009年

10 辛宁;PDX-1真核表达载体构建及其在大鼠骨髓间充质干细胞中的表达[D];郑州大学;2010年

【二级参考文献】

中国期刊全文数据库 前1条

1 汪桦;田江红;薛小平;雷迎峰;陈任安;吕欣;杨敬;孙梦宁;姚敏;;人源性抗丙型肝炎病毒核糖体展示单链抗体库的构建[J];解放军医学杂志;2010年03期

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 余宙耀,陈文吟,饶桂荣,粟宽源;重组人抗-HBs单链抗体与白细胞介素2融合蛋白的表达、纯化及活性鉴定[J];解放军医学杂志;2004年02期

2 邵锴;姜海燕;张国利;岳玉环;朱平;吴广谋;刘瑞田;;从噬菌体抗体库中筛选抗HIV-Tat蛋白单链抗体[J];中国实验诊断学;2008年05期

3 王辉;黄英;王琰;沈倍奋;;大容量天然噬菌体抗体库的建立及多样性初步验证[J];军事医学科学院院刊;2008年04期

4 曾令宇,黄强,陈利弘,万琳,卢晓风;表达于大肠杆菌中的人源性抗CTLA4单链抗体复性方法探索[J];生物医学工程学杂志;2005年03期

5 蔡昆;王慧;史晶;包士中;侯晓军;荫俊;;新型重组人源抗狂犬病毒糖蛋白单链抗体的制备及活性分析[J];军事医学科学院院刊;2007年06期

6 汪桦;薛小平;雷迎峰;宋凯;呼延霆;王伟;杨慧;;鼠源性抗人HAAH mAb可变区基因克隆及单链抗体的构建和表达[J];细胞与分子免疫学杂志;2010年05期

7 尹继刚,张西臣,郑印焕,王延钊,李建华;抗隐孢子虫子孢子表膜单链抗体4G4的基因克隆及序列测定[J];寄生虫与医学昆虫学报;2004年04期

8 夏汝山,乔媛媛,王刚,陈宇萍,沈柱,王琰,刘玉峰;从噬菌体抗体库中筛选抗角蛋白单链抗体[J];免疫学杂志;2004年06期

9 孟艳玲;温伟红;薛茜;张勇;张巍;鲍炜;任君琳;贾林涛;王成济;杨安钢;;人抗HBsAg单链抗体/鱼精蛋白截短体融合蛋白基因的构建、表达及活性鉴定[J];第四军医大学学报;2006年15期

10 李丙所;马龙洋;周红兵;党军强;任彦顺;窦科峰;;人源肝癌单链抗体(scFv)基因真核表达载体的构建和表达[J];细胞与分子免疫学杂志;2008年05期

中国重要会议论文全文数据库 前10条

1 王长军;唐家琪;李先富;潘秀珍;操敏;;抗人红细胞血型抗原噬菌体单链抗体的研究[A];面向21世纪的科技进步与社会经济发展（下册）[C];1999年

2 王欲晓;乔媛媛;周丽君;;人源性抗蓖麻单链抗体的分离纯化和活性鉴定[A];第六届全国免疫学学术大会论文集[C];2008年

3 郭崇志;王玉霞;孙曼霁;;抗电鳐乙酰胆碱酯酶单克隆抗体3F3的单链抗体高级结构的计算机模拟及其抑制酶活性机理探讨[A];第七届全国生化药理学术讨论会论文摘要集[C];2000年

4 汤永民;宁铂涛;曹江;沈红强;钱柏芹;张海忠;张怡;郭莉;;抗人CD14新克隆ZCH-7-2F9单链抗体真核表达载体的构建、表达及鉴定[A];2005年华东六省一市血液病学学术会议暨浙江省血液病学学术年会论文汇编[C];2005年

5 严丹丹;杨福辉;方瑾;宋今丹;;抗人大肠癌基因工程双价单链抗体的构建及表达[A];中国细胞生物学学会2005年学术大会、青年学术研讨会论文摘要集[C];2005年

6 刘梦元;黄华j;尹长城;王祥斌;;抗TNF-α单链抗体的构建、表达及一步柱上纯化和复性[A];中国生物工程学会第四次会员代表大会暨学术讨论会论文摘要集[C];2005年

7 肖代雯;沈昕;邢薇;黄宇;雷萍;朱慧芬;刁智娟;刘红云;沈关心;;抗TfR双价抗体的构建、表达及其鉴定[A];中国免疫学会第五届全国代表大会暨学术会议论文摘要[C];2006年

8 李芳芳;;重症肌无力单链抗体融合蛋白的酵母菌表达及特异性鉴定[A];第六届全国免疫学学术大会论文集[C];2008年

9 祝怀平;王迎春;季顺东;江淼;白霞;阮长耿;;抗vWF与GPIb-IX结合部位的单链抗体制备及功能研究[A];第三届全国血液免疫学学术大会论文集[C];2003年

10 汪世华;张新艳;王天文;王宗华;;细菌HrpA蛋白的单链抗体的制备[A];2005全国第二届核酸疫苗研讨会论文集[C];2005年

中国重要报纸全文数据库 前10条

1 记者谢卫群;中国完成SARS病毒主要基因克隆和蛋白表达[N];人民日报海外版;2003年

2 胡德荣;生物体内痛觉诱发和维持新机制被揭示[N];健康报;2008年

3 通讯员 肖鑫 记者 朱智堂;曹雪涛等发现新型免疫分子[N];健康报;2000年

4 通讯员 朱智堂 肖鑫;我国免疫学研究取得重要进展[N];科技日报;2000年

5 记者 骆红初;隔离SARS与人体“第三者”露面 全球首个人源抗体基因库建成[N];上海科技报;2003年

6 肖鑫 邵逸;我国发现新型免疫分子全长基因[N];中国医药报;2000年

7 ;吲哚美辛诱导HL－60细胞凋亡过程中伴有β－catenin／c－myc信号转导途径的抑制[N];中国医药报;2003年

8 任沪生;我国试用核酸干扰技术治疗乳腺癌[N];医药导报;2004年

9 ;As_(2)S_(2)与STI571协同诱导K562细胞凋亡[N];中国医药报;2003年

10 ;无糖对体外培养的神经前体细胞损伤的影响[N];中国医药报;2003年

中国博士学位论文全文数据库 前10条

1 胡学军;抗乙肝病毒表面抗原PreS1(20-47)单链抗体基因克隆及其在大肠杆菌和烟草中的表达[D];大连理工大学;2002年

2 陈德宇;前列腺素D合成酶在男性生殖中的基础及应用研究[D];南京师范大学;2005年

3 付建芳;溶藻弧菌抗独特型抗体基因工程疫苗的研究[D];第四军医大学;2005年

4 余自强;抗血小板胶原受体糖蛋白VI单克隆抗体的制备和功能研究[D];苏州大学;2005年

5 熊盛;重组人源抗HBsAg单链抗体在大肠杆菌和巴氏毕赤酵母中的表达、纯化与性质鉴定[D];华南理工大学;2002年

6 王霞;抗人胃泌素单克隆抗体及其单链抗体的研制[D];四川大学;2004年

7 邵长利;抗人红细胞单链抗体融合HIV-1gp41抗原肽双功能分子的制备与鉴定[D];中国人民解放军军事医学科学院;2007年

8 万忠海;抗PEA单抗和单链抗体制备及在绿脓感染中的应用[D];吉林大学;2008年

9 安广宇;抗血小板膜糖蛋白基因工程抗体的制备和性质研究[D];苏州大学;2001年

10 孙红;抗ICAM-1单链抗体的制备及其生物学活性研究[D];吉林大学;2008年

中国硕士学位论文全文数据库 前10条

1 江淼;抗活化血小板表面受体全套单链抗体噬菌体展示文库的构建和筛选[D];苏州大学;2003年

2 徐飞虎;抗肺癌单链抗体偶联绿色荧光蛋白基因的构建及表达研究[D];浙江大学;2003年

3 王溪桥;大容量人源肝癌核糖体展示单链抗体库的构建[D];兰州大学;2010年

4 张薇;抗T-2毒素单链抗体的制备及该毒素对细胞毒性影响的初步研究[D];福建农林大学;2010年

5 张庆丽;抗EGFRvⅢ特异性单链抗体的构建及其靶向性研究[D];南华大学;2011年

6 樊春波;全人源抗CCR7噬菌体单链抗体的筛选及初步鉴定[D];重庆医科大学;2010年

7 柴蔚然;重组人TNF-α免疫小鼠全套单链抗体噬菌体表面展示文库的构建[D];山西医科大学;2003年

8 李辉;重症肌无力抗乙酰胆碱受体单链抗体A7基因的表达及特性鉴定[D];延边大学;2005年

9 邹德生;抗cyclin D1人源单链抗体的原核表达、纯化及活性研究[D];吉林大学;2006年

10 肖代雯;抗TfR单链抗体及其双价抗体的构建、表达及鉴定[D];华中科技大学;2006年

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本文编号：1264176