PDGF-GAL真核表达载体的构建及细胞表达

发布时间：2017-12-13 16:40

  本文关键词：PDGF-GAL真核表达载体的构建及细胞表达

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【摘要】：旨在构建真核表达载体pcDNA-PDGF-GAL,观察重组质粒转染N-2a细胞后甘丙肽基因(galanin,GAL)的表达水平。采用PCR方法,以重组质粒pUC18-PDGF-GAL为模板,扩增PDGF-GAL基因序列,最终定向克隆入载体pcDNA3.1并替换该载体的CMV启动子与增强子序列,从而构建具有神经细胞特异性的表达载体pcDNA-PDGF-GAL。然后利用脂质体法将重组质粒瞬时转染小鼠N-2a细胞,分别在转染后24、48和72 h收集细胞及细胞培养物,采用RT-PCR和ELISA方法,鉴定GAL基因在神经细胞中的过表达。结果显示,经PCR和DNA序列测定证实,目的基因已插入表达载体,RT-PCR和ELISA证明,脂质体法瞬时转染N-2a细胞实现GAL基因的过表达。成功构建pcDNA3.1-PDGF-GAL,实现GAL基因在N-2a细胞过表达,从而为制作过表达GAL的稳转细胞及进一步研究GAL在神经系统的生物学功能奠定基础。
【作者单位】： 山西医科大学实验动物中心;
【分类号】：R346
【正文快照】： 甘丙肽是一种广泛分布外周和中枢神经系统的神经肽,研究发现,它具有调节胰腺分泌,促进食欲,抑制脂肪组织中抵抗素基因的表达,影响胃肠蠕动,提高垂体生长激素,催乳素,促黄体生成激素释放等功能,尤其在学习,记忆,痛觉和脊神经反射等神经功能方面发挥重要作用。国外不仅利用外源

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本文编号：1285868