人主动脉瓣间质细胞原代培养及体外钙化模型的建立

发布时间：2017-12-17 22:00

  本文关键词：人主动脉瓣间质细胞原代培养及体外钙化模型的建立

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【摘要】：目的原代培养人主动脉瓣间质细胞并建立体外瓣膜细胞钙化模型,诱导人主动脉瓣间质细胞向成骨细胞分化,并观察其表型变化。方法采用胶原酶两次消化法原代培养人主动脉瓣间质细胞,取传代3～7代间质细胞,随机分为2组,实验组以钙化诱导培养基培养,对照组以标准培养基培养。1周后,行von Kossa染色观察钙化结节形成情况,分光光度计测定碱性磷酸酶活性,免疫荧光染色检测瓣膜间质细胞表型蛋白,real-time PCR及蛋白质印迹分析检测成骨相关因子的表达,评价模型建立情况。结果培养1周后实验组出现钙化结节,每孔钙化结节数量[(51.20±14.31)个]高于对照组[(3.60±1.82)个],差异有统计学意义(P0.05),同时实验组碱性磷酸酶活性较对照组升高(约上升4倍,P0.05),细胞收缩表型平滑肌肌动蛋白(α-SMA)增高。Real-time PCR及蛋白质印迹分析提示,实验组中成骨相关因子Runx2、osteocalcin及osteopontin在mRNA及蛋白水平均较对照组升高,磷酸化Smad1/5/8蛋白表达也同时升高,差异有统计学意义(P0.05)。结论成功建立了人主动脉瓣间质细胞体外诱导钙化模型,诱导后间质细胞呈现相对激活状态,表型向收缩表型和成骨表型转化,为今后实验提供了可靠的细胞模型。
【作者单位】： 第二军医大学长海医院胸心外科;
【基金】：上海市基础研究重点项目(11JC1415900)~~
【分类号】：R329
【正文快照】： 既往认为钙化性主动脉瓣疾病(ealeifie aortievalve disease，CAVD)为不可调控的退行性改变，但近年来临床研究发现，瓣膜钙化是类似成骨样分化的主动过程，并涉及多个成骨相关因子的调节(’」。瓣膜间质细胞(valve interstitial CellS，VICS)向成骨细胞样细胞表型的主动转化

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