小凹蛋白-1下调人脐静脉内皮细胞外钙敏感受体介导的钙内流的作用机制

发布时间：2017-12-19 09:31

  本文关键词：小凹蛋白-1下调人脐静脉内皮细胞外钙敏感受体介导的钙内流的作用机制

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【摘要】：目的:研究小凹蛋白-1(Cav-1)对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)细胞外钙敏感受体(CaR)介导钙内流的作用机制。方法:取2～3代HUVECs,采用细胞膜穴样凹陷(caveolae)结构破坏剂非律平(filipin)和甲基-β-环糊精(MβCD)及Cav-1基因沉默,配合CaR激动剂精胺(spermine)和负性变构调节剂Calhex 231。Fura-2/AM负载检测细胞内Ca2+浓度([Ca2+]i)。Western blotting检测HUVECs中Cav-1以及CaR蛋白表达,免疫共沉淀技术检测Cav-1和CaR相互作用。用蔗糖密度梯度离心的方法提取并鉴定caveolae,Western blotting检测caveolae的标志蛋白Cav-1和浮舰蛋白1(flotillin-1)及CaR表达。同时检测胞膜、胞浆和高尔基体标志蛋白:转铁蛋白受体(TfR)、β-肌动蛋白(β-actin)和β-外被体蛋白(β-COP)。检测富含Cav-1膜(CEM)区、非caveolae I区(NCF I)和II区(NCF II)的Cav-1和CaR表达。结果:(1)细胞外液为含钙液时,Calhex 231完全阻断精胺刺激引起的[Ca2+]i升高(P0.05),MβCD可加强精胺升高[Ca2+]i的作用(P0.05)。不同浓度MβCD处理后各组Cav-1和CaR相互作用的差异无统计学意义(P0.05);(2)免疫共沉淀结果显示,各组Cav-1和CaR蛋白表达的差异无统计学意义(P0.05);(3)与control组比较,spermine+Ca2+组、filipin+spermine+Ca2+组和MβCD+spermine+Ca2+组CEM区的Cav-1和CaR蛋白表达均降低(P0.05),NCF I区的Cav-1和CaR蛋白表达增加(P0.05),NCF II区Cav-1蛋白表达增加(P0.05),而CaR蛋白表达的差异无统计学意义(P0.05)。结论:在HUVECs中,Cav-1和CaR共定位于同一caveolae区,同时Cav-1对CaR介导的Ca2+内流有下调作用,其机制可能与Cav-1抑制CaR膜定位、促使其向非caveolae区转位及减弱其对激动剂的反应性有关。
【作者单位】： 石河子大学医学院新疆地方病与民族高发病教育部重点实验室;石河子大学医学院病理生理教研室;石河子大学医学院医学机能实验中心;
【基金】：国家自然科学基金资助项目(No.30860099)
【分类号】：R363
【正文快照】： 血管内皮功能障碍是高血压、冠心病、糖尿病等多种心脑血管疾病的共同病理机制,主要与NO的作用有关,而血管内皮细胞持续Ca2+内流是激活内皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase,eNOS)生成NO的关键调节因素。细胞内Ca2+浓度(intracellular Ca2+concentration,[Ca

【参考文献】

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【共引文献】

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【二级参考文献】

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【相似文献】

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中国博士学位论文全文数据库 前5条

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中国硕士学位论文全文数据库 前10条

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本文编号：1307730