大鼠肾小球足细胞的原代培养与鉴定

发布时间：2017-12-21 06:29

  本文关键词：大鼠肾小球足细胞的原代培养与鉴定　出处：《四川大学学报(医学版)》2013年06期 　论文类型：期刊论文

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【摘要】：目的建立一种简单适用的原代培养与鉴定大鼠肾小球足细胞的方法。方法通过差异过筛法收获SD大鼠(体质量60~100g)肾小球,2g/LⅣ型胶原酶消化肾小球,组织块种植法将肾小球种植于添加有ITS-X(含转铁蛋白-亚硒酸钠-胰岛素)的K1-3T3培养基,9~10d后首次传代培养。通过观察细胞形态结合免疫组织化学SP法检测角蛋白、结蛋白和Wilms瘤抑癌因子-1(WT-1)表达以鉴定足细胞。结果种植肾小球3d后,可见从肾小球内生长出来的细胞逐渐增多,9~10d后融合成鹅卵石样外观。传代后的细胞变为大而扁平的星形细胞,有明显突起和微绒毛;免疫组织化学法显示结蛋白表达呈阴性、角蛋白和WT-1表达呈阳性,提示所培养的细胞为足细胞。结论种植胶原酶消化的肾小球是一种简单易行的原代培养大鼠肾小球足细胞方法。WT-1可作为鉴定大鼠肾小球足细胞的合适标记。
【作者单位】： 四川大学华西第二医院儿科;四川大学华西基础医学与法医学院生物化学与分子生物学教研室;
【基金】：国家自然科学基金(No.30700775)资助
【分类号】：R329
【正文快照】： 足细胞不仅是肾小球疾病的被动受害者,而且主动参与肾小球疾病的发生和发展。要从细胞分子水平研究足细胞生物学功能,就必须体外培养足细胞。然而,足细胞是高度分化的终末细胞,体外培养很困难。随着基因敲除、RNA干扰技术的发展,国外已建立人[1]和小鼠[2]肾小球足细胞系。但是

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