内质网应激在Bim介导缺氧致心肌细胞凋亡中的作用
本文关键词：内质网应激在Bim介导缺氧致心肌细胞凋亡中的作用 出处：《中国病理生理杂志》2013年12期 论文类型：期刊论文
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【摘要】：目的:探讨内质网应激在Bim介导缺氧致心肌细胞凋亡中的作用。方法:在体外原代培养出生1~3 d大鼠心肌细胞,并用抗α-横纹肌肌动蛋白免疫组化法进行鉴定。设计并化学合成3对靶向bim的siRNA,用脂质体法将siRNA转染心肌细胞,筛选沉默效率最高的siRNA。实验分组:(1)空白对照组;(2)缺氧组;(3)缺氧+脂质体组;(4)缺氧+阴性对照siRNA组;(5)缺氧+Bim-siRNA组。MTT法观察细胞活性;流式细胞术检测细胞凋亡率及细胞内钙离子浓度变化情况;Western blotting检测内质网应激标志分子caspase-12和三磷酸肌醇(IP3)的表达情况。结果:免疫组化鉴定证实大鼠心肌细胞原代培养成功。在荧光显微镜下,转染了阴性对照siRNA组的细胞中观察到绿色荧光,即转染成功;Western blotting结果显示,Bim-siRNA转染均能有效降低Bim蛋白的表达,其中第2对沉默效率最高,达到86.73%。缺氧损伤导致心肌细胞活性明显下降(P0.05),转染Bim-siRNA后细胞活性较阴性对照组升高。缺氧细胞凋亡率较对照组明显增加(P0.01),细胞内钙离子浓度明显增高,而沉默bim的表达能降低细胞凋亡率和细胞内钙离子浓度。缺氧导致内质网应激标志分子caspase-12和IP3表达较空白对照组明显上调(均P0.05),而抑制Bim表达后caspase-12和IP3表达明显降低。结论:沉默bim的表达能有效抑制缺氧导致心肌细胞凋亡的作用,内质网应激标志分子caspase-12和IP3可能参与了Bim介导缺氧致心肌细胞凋亡的过程。这有望为临床心肌缺血缺氧损伤的治疗提供新思路。
[Abstract]:Objective: To investigate the role of endoplasmic reticulum stress in Bim mediated hypoxia induced cardiomyocyte apoptosis. Methods: the cardiac myocytes of 1~3 D rats were born in vitro, and were identified by anti alpha rhabdomyocyte actin immuno histochemical method. 3 pairs of target BIM siRNA were designed and chemically synthesized, and siRNA was transfected into cardiomyocytes by liposome method to screen the siRNA with the highest silence efficiency. Experimental groups: (1) blank control group; (2) hypoxia group; (3) hypoxia + liposome group; (4) anoxic + negative control group siRNA; (5) hypoxia +Bim-siRNA group. MTT method was used to observe cell viability. Flow cytometry was used to detect apoptosis rate and intracellular calcium concentration. Western blotting was used to detect the expression of caspase-12 and three phosphoinositide (IP3) in endoplasmic reticulum stress. Results: immunohistochemical identification confirmed that the primary culture of rat cardiomyocytes was successful. Under fluorescence microscope, green fluorescence was observed in transfected cells of negative control group siRNA, that is, transfection was successful. Western blotting results showed that Bim-siRNA transfection could effectively reduce the expression of Bim protein, and second of them had the highest silencing efficiency, reaching 86.73%. The activity of myocardial cells decreased significantly (P0.05). After Bim-siRNA transfection, the cell activity was higher than that of the negative control group. The apoptosis rate of hypoxia cells increased significantly compared with the control group (P0.01), the intracellular calcium concentration increased significantly, while the expression of BIM silencing decreased the apoptosis rate and intracellular calcium concentration. Hypoxia induced the expression of caspase-12 and IP3 in the endoplasmic reticulum stress markers significantly higher than that in the blank control group (P0.05), while the expression of caspase-12 and IP3 decreased significantly after the inhibition of Bim expression. Conclusion: silencing BIM expression can effectively inhibit the apoptosis of cardiomyocytes induced by hypoxia. Endoplasmic reticulum stress markers caspase-12 and IP3 may participate in the process of Bim mediated hypoxia induced cardiomyocyte apoptosis. This is expected to provide a new way of thinking for the treatment of myocardial ischemia and hypoxia injury.
【作者单位】： 南昌大学第二附属医院心内科 江西省分子医学重点实验室;
【基金】：国家自然科学基金资助项目(No.81060013)
【分类号】：R363
【正文快照】： 唯BH3蛋白Bim(Bcl-2-interacting mediator ofcell death)是Bcl-2家族中BH3-only亚家族的成员,仅有1个BH3同源结构域,是一种重要的凋亡调节蛋白。Bim广泛分布于机体各种组织中,与调节细胞凋亡的功能密切相关,具有促凋亡的活性。Bim的促凋亡活性受到严格调控,涉及多种信号通路
【参考文献】
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【共引文献】
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，本文编号：1342530
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