人血小板生成素基因的克隆及CHO稳定细胞系的建立

发布时间：2017-12-28 18:25

  本文关键词：人血小板生成素基因的克隆及CHO稳定细胞系的建立　出处：《家畜生态学报》2013年02期 　论文类型：期刊论文

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【摘要】：以人肝cDNA为模板克隆了人血小板生成素(Human Thrombopoietin,hTPO)基因,利用基因重组技术构建了带有新霉素抗性基因(neo)筛选标记的pcDNA3.1(+)-hTPO真核表达载体,将重组质粒瞬时转染293T细胞,用鼠抗人TPO单抗Western blot检测TPO蛋白的瞬时表达;再将重组质粒转染中国仓鼠卵巢细胞(Chinese Hamster Ovary,CHO),应用400μg/mL的G418筛选克隆,经PCR及Western blot验证,获得了3株hTPO蛋白表达水平不同的CHO细胞系,为获得大量蛋白并进行活性功能试验及临床应用奠定基础。
[Abstract]:The human liver cDNA as template and cloned human thrombopoietin (Human Thrombopoietin hTPO) gene, constructed with neomycin resistance gene by gene recombination technique (NEO) marker pcDNA3.1 (+) -hTPO eukaryotic expression vector, the recombinant plasmid was transiently transfected into 293T cells. The transient expression of mouse anti human TPO monoclonal antibody to detect TPO protein Western blot; then the recombinant plasmid was transfected into China hamster ovary cells (Chinese Hamster Ovary, CHO), using 400 g/mL G418 clones were screened by PCR and Western blot verification, obtained 3 strains of hTPO protein expression level in different CHO cell lines, to lay a foundation for obtaining large amount of protein and activity and function test clinical application.
【作者单位】： 东北农业大学生命科学学院;山东省农业科学院奶牛研究中心;济南军区军犬训练大队;
【基金】：泰山学者海外特聘专家专项 国家奶牛产业技术体系建设专项 国家自然科学基金(31272586) 国家转基因重大专项(2009ZX08007-006B,2011ZX08007-002,2011ZX08008-004) 济南市高校院所主创新计划(201004027,201202059,201102034)
【分类号】：R346
【正文快照】： 血小板生成素(Thrombopoietin,TPO)是刺激巨核细胞生长[1]及分化的内源性细胞因子,对巨核细胞生成的各阶段均有刺激作用[2],包括前体细胞的增殖和多倍体巨核细胞的发育及成熟,从而升高血小板数目。另外,TPO可直接作用于多功能造血干细胞,提高其分化和自我复制的能力[3];而当

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本文编号：1346938