斑马鱼TIM家族基因鉴定及其在适应性体液免疫应答中的功能研究

发布时间：2018-01-04 09:13

  本文关键词：斑马鱼TIM家族基因鉴定及其在适应性体液免疫应答中的功能研究　出处：《浙江大学》2015年博士论文　论文类型：学位论文

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【摘要】：T细胞免疫球蛋白粘蛋白(Tcell Ⅰg and mucin, TIM )是一类Ⅰ型跨膜糖蛋白,近年来因其在免疫系统中发挥重要作用而受到高度关注。本论文首次在斑马鱼中开展鱼类TIM家族分子鉴定与功能研究,重点探讨了斑马鱼TIM (DrTIM)家族两个主要分子DrTIM-1L和DrTIM-4L的免疫学特性。采用分子克隆技术在斑马鱼中成功获得了与哺乳动物TIM-1和TIM-4同源的TIM-1和TIM-4样家族分子(DrTIM-1L和DrTIM-4L),生物信息学分析结果显示,DrTIM- 1L和DrTIM-4L分子均属于I型跨膜结构蛋白,其中包括免疫球样蛋白IgV、粘连区、跨膜区和胞质区等结构。亚细胞定位分析显示,DrTIM-4L主要表达于细胞膜上,而DrTIM-1L则主要分布于细胞胞质区域,受到相应的刺激后可转移至细胞膜上。通过对斑马鱼白细胞的免疫荧光标记显示,DrTIM-4L可与MHC Ⅱ阳性细胞共标记,提示其主要分布于抗原递呈细胞(APC),而DrTIM-1则与CD4阳性细胞共标记,提示其主要分布于CD4+T细胞,经抗原刺激后,DrTIM-4L+MHCⅡ+和DrTIM-1L+CD4+T双阳性细胞比例分别得到明显上调,提示DrTIM-1L和DrTIM-4L可能在APC启动的适应性免疫应答中发挥作用。基因表达分析结果显示,经抗原刺激后,APC和T细胞表面的DrTIM-1L和DrTIM-4L表达上调,外周血等免疫组织中DrTIM-4L+MHCⅡ+和DrTIM-1L+CD4+T双阳性细胞比例显著增加。通过针对DrTIM-4L和DrTIM-1L基因的siRNA体内干扰实验,结合抗体封闭技术,发现在DrTIM-4L和DrTIM-1L表达受到干扰的情况下,T细胞增殖活化受到明显抑制,表明DrTIM-4L和DrTIM-1L参与了适应性免疫中T细胞的增殖活化；利用免疫磁珠分选技术分离APC和CD4+T细胞,并进行体外抗原递呈功能研究,进一步证实DrTIM-4L和DrTIM-1L对APC介导的T细胞增殖有调节作用,最终可影响IgM的产生以及实验鱼对致病菌(A.hydrophila )的免疫保护力。此外,我们还克隆到一种新的可溶性形式的TIM-4L分子(sDrTIM-4L),发现它在适应性免疫过程中具有抑制T细胞增殖活化的功能。研究结果为深入揭示TIM家族在调节适应性体液免疫中作用及其功能演化机制,提供了斑马鱼实验研究模型和科学依据。
[Abstract]:T cell 鈪，

本文编号：1377920