人14-3-3σ基因启动子荧光素酶报告基因载体的构建及其转录活性分析

发布时间：2018-01-16 20:36

  本文关键词：人14-3-3σ基因启动子荧光素酶报告基因载体的构建及其转录活性分析　出处：《现代预防医学》2013年01期 　论文类型：期刊论文

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【摘要】：目的构建人14-3-3σ基因启动子的荧光素酶报告基因载体,探讨该启动子的转录活性。方法运用UCSC软件对人14-3-3σ基因5′端2000bp进行启动子特征分析和转录因子结合位点分析。克隆14-3-3σ基因5′端5个不同长度的启动子片段,与荧光素酶报告基因载体pGL3-Basic重组,获得5个不同长度的14-3-3σ启动子萤光素酶报告基因载体,分别转染HeLa细胞,通过双荧光素酶活性分析实验进行转录活性分析。将转录因子AP-2α的过表达质粒pCMV-Myc/AP-2α分别与以上不同长度的14-3-3σ启动子萤光素酶报告基因载体共转染HeLa细胞,通过双荧光素酶活性分析实验检测AP-2α对14-3-3σ启动子转录活性的影响。结果序列分析发现人14-3-3σ启动子基因5′端1349bp的区域内存在多个潜在的AP-2α结合位点,成功构建了5个不同长度的14-3-3σ启动子报告基因载体。双荧光素酶活性分析显示5个启动子片段均有转录活性,AP-2α可增强14-3-3σ启动子转录活性。结论成功构建了14-3-3σ启动子的报告基因载体,为进一步研究AP-2α对14-3-3σ的调控奠定了基础。
[Abstract]:Objective to construct the luciferase reporter gene vector of human 14-3-3 蟽 gene promoter. Methods the promoter characteristics and transcription factor binding sites of human 14-3-3 蟽 gene 5'terminal 2000bp were analyzed by UCSC software. 3 蟽 gene 5 'end of five different lengths of promoter fragments. After recombination with luciferase reporter gene vector pGL3-Basic, five different length 14-3-3 蟽 promoter luciferase reporter gene vectors were obtained and transfected into HeLa cells. The transcriptional activity was analyzed by double luciferase activity analysis. The overexpression plasmid pCMV-Myc/AP-2 伪 of transcription factor AP-2 伪 was linked with 14-3-3 蟽 of the above length. Motility luciferase reporter gene vector was co-transfected into HeLa cells. The effect of AP-2 伪 on the transcriptional activity of 14-3-3 蟽 promoter was detected by double luciferase assay. There are many potential AP-2 伪 binding sites in the region. Five different length 14-3-3 蟽 promoter reporter gene vectors were successfully constructed. The results of double luciferase activity analysis showed that all the five promoter fragments had transcriptional activity. AP-2 伪 can enhance the transcriptional activity of 14-3-3 蟽 promoter. Conclusion the reporter gene vector of 14-3-3 蟽 promoter was constructed successfully. It lays a foundation for further study on the regulation of 14-3-3 蟽 by AP-2 伪.
【作者单位】： 南方医科大学公共卫生与热带医学学院预防医学实验教学中心;广东医学院公共卫生学院劳动卫生与环境卫生教研室;
【基金】：国家自然科学基金(31070687) 广东省自然科学基金(9451051501002535)
【分类号】：R346
【正文快照】： 14-3-3σ基因是一种肿瘤抑制基因,受到P53调控,由14-3-3σ基因编码的14-3-3σ蛋白是一种上皮特异性标记物,主要分布于上皮细胞,正常组织中鳞状上皮14-3-3σ表达最强。14-3-3σ蛋白可与多种信号蛋白包括激酶、磷酸酶或跨膜蛋白等相互作用,在细胞周期调控、信号转导、细胞分化

【共引文献】

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